發(fā)布時(shí)間：2017-06-13 21:07

  本文關(guān)鍵詞：歸腎丸對(duì)DOR模型小鼠卵巢功能影響的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過(guò)腹腔注射環(huán)磷酰胺建立小鼠卵巢功能下降的模型,觀察卵巢功能下降的模型小鼠血清AMH、FSH、E2水平影響及卵巢信號(hào)通路中GDF-9mRNA、BPM-15mRNA、SCFmRNA的表達(dá),初步探討歸腎丸對(duì)改善卵巢儲(chǔ)備功能、提高卵泡質(zhì)量及信號(hào)傳導(dǎo)中GDF-9、BPM-15、SCF因子的影響;并驗(yàn)證本經(jīng)方治療卵巢儲(chǔ)備功能下降,卵泡發(fā)育障礙所致不孕的有效性,并進(jìn)一步為歸腎丸的中藥新藥研究開(kāi)發(fā)、以及臨床研究提供一定的科學(xué)依據(jù)。方法:選用周齡為8~10周BALB/c動(dòng)情周期正常的雌鼠60只。將BALB/c小鼠隨機(jī)分成六組:正常對(duì)照組簡(jiǎn)稱正常組、模型對(duì)照組簡(jiǎn)稱模型組、補(bǔ)佳樂(lè)組(含戊酸雌二醇片0.01mg/mL)簡(jiǎn)稱西藥組、中藥高劑量組(含歸腎丸1.8g/mL)簡(jiǎn)稱高劑量組、中藥中劑量組(含歸腎丸0.9g/mL)簡(jiǎn)稱中劑量組、中藥低劑量組(含歸腎丸0.45g/mL)簡(jiǎn)稱低劑量組,共計(jì)六組。除正常組BALB/c小鼠外,其余五組小鼠采用一次性腹腔注射法,以90mg/kg劑量環(huán)磷酰胺復(fù)制卵巢儲(chǔ)備功能下降所致卵泡發(fā)育障礙的動(dòng)物模型。從造模后第二天開(kāi)始行陰道脫落細(xì)胞學(xué)涂片觀察記載小鼠動(dòng)情周期變化情況,并且所有BALB/c小鼠持續(xù)灌胃30天,每只0.3mL/日/次,其中正常組和模型組用0.9%的生理鹽水灌胃。灌胃結(jié)束后第2天處死小鼠,分別采用酶聯(lián)免疫吸附法和化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)血清雌二醇(E2)、抗苗勒氏管激素(AMH)、促卵泡激素(FSH)水平;采血后將處死的小鼠,摘取雙側(cè)卵巢組織,稱取卵巢濕重;采用Real-Time PCR檢測(cè)卵巢組織中的GDF-9mRNA、BPM-15mRNA、SCFmRNA表達(dá)水平。結(jié)果:1.BALB/c小鼠一般情況比較:正常組小鼠飲食量正常,皮毛干爽光滑,精神狀態(tài)良好,喜動(dòng)而不喜臥,大便呈黑色麥粒狀。而其它各組小鼠食欲減退,皮毛汗?jié)褙Q立稀疏,精神萎靡,弓背萎縮,喜擠臥而不喜動(dòng),行動(dòng)呆滯,呼吸深遲,倦怠嗜睡,消瘦,大便溏,色澤呈淺灰色。與正常組小鼠的卵巢濕重相比,模型組、西藥組、中藥高、中、低劑量組小鼠的卵巢濕重均無(wú)差異性(p0.05)。2.balb/c小鼠動(dòng)情周期變化:與正常組相比,模型組生殖周期天數(shù)明顯呈升高趨勢(shì),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。而模型組balb/c雌鼠的動(dòng)情周期較正常組相比明顯下降,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p≤0.01)說(shuō)明造模成功。3.對(duì)血清amh的影響:與正常組相比,模型組amh的值明顯低于正常組(p0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,西藥組、中藥高、中、低劑量組的血清amh值無(wú)差異性(p0.05);與模型組相比,西藥組、中藥高、中、低劑量組amh值均高于模型組(p0.05);與西藥組相比,與中藥各組amh值均無(wú)差異性(p0.05);中藥組高、中、低劑量組amh的值同比,中藥低劑量組低于中藥高、中劑量組,具有明顯差異性(p0.05)。4.對(duì)血清fsh、e2的影響:與正常組相比,模型組、西藥組、中藥高、中、低劑量組血清fsh的值升高(p0.05),e2值均降低,其中模型組、中藥低劑量組e2值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);與模型組相比,西藥組、中藥高、中、低劑量fsh的值均低于模型組(p0.05),而e2值高于模型組(p0.05);與西藥組相比,中藥各組fsh、e2的值無(wú)差異性(p0.05);中藥各組之間同比,中藥低劑量組的e2的值低于中藥高、中劑量組(p0.05)。5.對(duì)卵巢內(nèi)gdf-9mrna相對(duì)表達(dá)的影響:與正常組相比,模型組、西藥組、中藥高、中、低劑量組的gdf-9mrna相對(duì)蛋白表達(dá)量低于正常組,其中模型組較為顯著(p0.01);與模型組相比,西藥組、中藥高、中劑量組的gdf-9mrna相對(duì)蛋白表達(dá)量高于模型組(p0.05),與西藥組相比,中藥各組的gdf-9mrna相對(duì)蛋白表達(dá)量無(wú)明顯差異(p0.05);中藥各組之間同比,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。6.對(duì)卵巢內(nèi)BPM-15mRNA相對(duì)表達(dá)的影響:與正常組相比,模型組、西藥組、中藥高、中、低劑量組卵巢中BMP-15mRNA的相對(duì)表達(dá)均低于正常組,其中模型組與中藥低劑量組較為顯著(P0.01);與模型組相比,西藥組、中藥高、中、低劑量組卵巢中BMP-15mRNA的相對(duì)表達(dá)高于模型組,其中西藥組、中藥高、中劑量組較為顯著(P0.01);與西藥組相比,中藥各組無(wú)明顯差異(P0.05);與中藥各組之間同比,中藥高、中劑量組卵巢中BMP-15mRNA的相對(duì)表達(dá)高于中藥低劑量組(P0.01)。7.對(duì)卵巢內(nèi)SCFmRNA相對(duì)表達(dá)的影響:與正常組相比,模型組、西藥組、中藥高、中、低劑量組卵巢中SCFmRNA的相對(duì)表達(dá)均低于正常組,其模型組與中藥低劑量組較為顯著(P0.05);與模型組相比,西藥組、中藥高、中、低劑量組卵巢中SCFmRNA的相對(duì)表達(dá)高于模型組,其西藥組、中藥高、中劑量組具有明顯差異性(P0.05);與西藥組相比,中藥各組卵巢中SCFm RNA的相對(duì)表達(dá)低于西藥組,其中藥低劑量組具有明顯差異性(P0.05);中藥各組之間同比,無(wú)明顯差異性(P0.05)。結(jié)論:1.采用CTX行腹腔一次性注射的方法可復(fù)制雌鼠卵巢儲(chǔ)備功能下降模型。2.歸腎丸可有效提高DOR模型小鼠血清AMH及E2水平、降低血清FSH水平。3.歸腎丸可增強(qiáng)卵巢內(nèi)GDF-9、BPM-15、SCF的mRNA的表達(dá),調(diào)整其卵母細(xì)胞與顆粒細(xì)胞之間的“對(duì)話”,啟動(dòng)原始卵泡的發(fā)育,提高卵巢儲(chǔ)備功能。
【關(guān)鍵詞】：歸腎丸 卵巢儲(chǔ)備功能下降 卵巢功能影響 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R285.5;R-332
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-14
• 縮略詞表14-15
• 前言15-19
• 參考文獻(xiàn)18-19
• 第一部分 理論研究19-26
• 一．卵巢儲(chǔ)備功能下降的中醫(yī)診治研究19-24
• 1. 病因病機(jī)19-21
• 2. 中醫(yī)論治21-24
• 參考文獻(xiàn)24-26
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)研究26-59
• 實(shí)驗(yàn)一 DOR模型小鼠的建立26-34
• 1.材料26
• 2.方法26-28
• 3.結(jié)果28
• 4.討論28-31
• 參考文獻(xiàn)31-34
• 實(shí)驗(yàn)二 歸腎丸對(duì)模型小鼠卵巢功能的影響34-47
• 1.材料34-36
• 2.方法36-39
• 3.結(jié)果39-42
• 4.討論42-45
• 參考文獻(xiàn)45-47
• 實(shí)驗(yàn)三 卵巢中GDF-9、BPM-15、SCF的mRNA各組含量的比較47-59
• 1.材料47-48
• 2.方法48-52
• 3.結(jié)果52-55
• 4.討論55-57
• 參考文獻(xiàn)57-59
• 第三部分 討論59-68
• 一. 歸腎丸立方依據(jù)淺析59
• 二. 歸腎丸立方特色淺析59-62
• 三. 歸腎丸中的方藥淺析62-65
• 參考文獻(xiàn)65-68
• 第四部分 結(jié)語(yǔ)68-70
• 一. 研究結(jié)論68
• 二. 新穎點(diǎn)68-69
• 三. 不足及展望69-70
• 附錄 1 文獻(xiàn)綜述 相關(guān)細(xì)胞因子維持卵泡靜息狀態(tài)的研究進(jìn)展70-79
• 參考文獻(xiàn)75-79
• 附錄 2 BALB/c小鼠的陰道涂片79-80
• 附錄 3 HE卵巢組織切片80-81
• 附錄 4 在學(xué)期間發(fā)表論文、科研、交流學(xué)習(xí)及獲獎(jiǎng)情況81-82
• 一． 在學(xué)校期間發(fā)表的論文81
• 二．在學(xué)期間參與科研情況81-82
• 致謝82

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3 徐曉娟;石曉霞;黃立華;;歸腎丸的現(xiàn)代應(yīng)用及研究現(xiàn)狀[J];黑龍江中醫(yī)藥;2013年01期

4 唐平;;歸腎丸加減治療青春期功血32例[J];南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2007年03期

5 韓璐;龔巍;;歸腎丸治療多囊卵巢綜合征治療的臨床療效分析[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2011年24期

6 張勇;;歸腎丸治閉經(jīng)療效好[J];求醫(yī)問(wèn)藥;2013年10期

7 吳克明;王家葵;劉鉞;張黎鵬;諶婕;童妍;;新加歸腎丸對(duì)雷公藤致卵巢功能損害小鼠模型的影響[J];成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2009年02期

8 帥振虹;胡小榮;;歸腎丸加味治療子宮內(nèi)膜偏薄不孕癥30例[J];江西中醫(yī)藥;2011年11期

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2 崔丹丹;馬雯雯;文露;宋坤琨;丁嘉慧;黃聰;張明敏;;歸腎丸對(duì)DOR小鼠卵巢Oct-4、MVH以及Egr-1的影響[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)生殖醫(yī)學(xué)分會(huì)首屆學(xué)術(shù)年會(huì)暨生殖醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)論文匯編[C];2014年

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  本文關(guān)鍵詞：歸腎丸對(duì)DOR模型小鼠卵巢功能影響的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：447590