發(fā)布時間：2017-06-13 21:07

  本文關鍵詞：歸腎丸對DOR模型小鼠卵巢功能影響的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過腹腔注射環(huán)磷酰胺建立小鼠卵巢功能下降的模型,觀察卵巢功能下降的模型小鼠血清AMH、FSH、E2水平影響及卵巢信號通路中GDF-9mRNA、BPM-15mRNA、SCFmRNA的表達,初步探討歸腎丸對改善卵巢儲備功能、提高卵泡質量及信號傳導中GDF-9、BPM-15、SCF因子的影響;并驗證本經方治療卵巢儲備功能下降,卵泡發(fā)育障礙所致不孕的有效性,并進一步為歸腎丸的中藥新藥研究開發(fā)、以及臨床研究提供一定的科學依據(jù)。方法:選用周齡為8~10周BALB/c動情周期正常的雌鼠60只。將BALB/c小鼠隨機分成六組:正常對照組簡稱正常組、模型對照組簡稱模型組、補佳樂組(含戊酸雌二醇片0.01mg/mL)簡稱西藥組、中藥高劑量組(含歸腎丸1.8g/mL)簡稱高劑量組、中藥中劑量組(含歸腎丸0.9g/mL)簡稱中劑量組、中藥低劑量組(含歸腎丸0.45g/mL)簡稱低劑量組,共計六組。除正常組BALB/c小鼠外,其余五組小鼠采用一次性腹腔注射法,以90mg/kg劑量環(huán)磷酰胺復制卵巢儲備功能下降所致卵泡發(fā)育障礙的動物模型。從造模后第二天開始行陰道脫落細胞學涂片觀察記載小鼠動情周期變化情況,并且所有BALB/c小鼠持續(xù)灌胃30天,每只0.3mL/日/次,其中正常組和模型組用0.9%的生理鹽水灌胃。灌胃結束后第2天處死小鼠,分別采用酶聯(lián)免疫吸附法和化學發(fā)光免疫法檢測血清雌二醇(E2)、抗苗勒氏管激素(AMH)、促卵泡激素(FSH)水平;采血后將處死的小鼠,摘取雙側卵巢組織,稱取卵巢濕重;采用Real-Time PCR檢測卵巢組織中的GDF-9mRNA、BPM-15mRNA、SCFmRNA表達水平。結果:1.BALB/c小鼠一般情況比較:正常組小鼠飲食量正常,皮毛干爽光滑,精神狀態(tài)良好,喜動而不喜臥,大便呈黑色麥粒狀。而其它各組小鼠食欲減退,皮毛汗?jié)褙Q立稀疏,精神萎靡,弓背萎縮,喜擠臥而不喜動,行動呆滯,呼吸深遲,倦怠嗜睡,消瘦,大便溏,色澤呈淺灰色。與正常組小鼠的卵巢濕重相比,模型組、西藥組、中藥高、中、低劑量組小鼠的卵巢濕重均無差異性(p0.05)。2.balb/c小鼠動情周期變化:與正常組相比,模型組生殖周期天數(shù)明顯呈升高趨勢,有統(tǒng)計學意義(p0.05)。而模型組balb/c雌鼠的動情周期較正常組相比明顯下降,差異均有統(tǒng)計學意義(p≤0.01)說明造模成功。3.對血清amh的影響:與正常組相比,模型組amh的值明顯低于正常組(p0.05),具有統(tǒng)計學意義,西藥組、中藥高、中、低劑量組的血清amh值無差異性(p0.05);與模型組相比,西藥組、中藥高、中、低劑量組amh值均高于模型組(p0.05);與西藥組相比,與中藥各組amh值均無差異性(p0.05);中藥組高、中、低劑量組amh的值同比,中藥低劑量組低于中藥高、中劑量組,具有明顯差異性(p0.05)。4.對血清fsh、e2的影響:與正常組相比,模型組、西藥組、中藥高、中、低劑量組血清fsh的值升高(p0.05),e2值均降低,其中模型組、中藥低劑量組e2值具有統(tǒng)計學意義(p0.05);與模型組相比,西藥組、中藥高、中、低劑量fsh的值均低于模型組(p0.05),而e2值高于模型組(p0.05);與西藥組相比,中藥各組fsh、e2的值無差異性(p0.05);中藥各組之間同比,中藥低劑量組的e2的值低于中藥高、中劑量組(p0.05)。5.對卵巢內gdf-9mrna相對表達的影響:與正常組相比,模型組、西藥組、中藥高、中、低劑量組的gdf-9mrna相對蛋白表達量低于正常組,其中模型組較為顯著(p0.01);與模型組相比,西藥組、中藥高、中劑量組的gdf-9mrna相對蛋白表達量高于模型組(p0.05),與西藥組相比,中藥各組的gdf-9mrna相對蛋白表達量無明顯差異(p0.05);中藥各組之間同比,無統(tǒng)計學意義(p0.05)。6.對卵巢內BPM-15mRNA相對表達的影響:與正常組相比,模型組、西藥組、中藥高、中、低劑量組卵巢中BMP-15mRNA的相對表達均低于正常組,其中模型組與中藥低劑量組較為顯著(P0.01);與模型組相比,西藥組、中藥高、中、低劑量組卵巢中BMP-15mRNA的相對表達高于模型組,其中西藥組、中藥高、中劑量組較為顯著(P0.01);與西藥組相比,中藥各組無明顯差異(P0.05);與中藥各組之間同比,中藥高、中劑量組卵巢中BMP-15mRNA的相對表達高于中藥低劑量組(P0.01)。7.對卵巢內SCFmRNA相對表達的影響:與正常組相比,模型組、西藥組、中藥高、中、低劑量組卵巢中SCFmRNA的相對表達均低于正常組,其模型組與中藥低劑量組較為顯著(P0.05);與模型組相比,西藥組、中藥高、中、低劑量組卵巢中SCFmRNA的相對表達高于模型組,其西藥組、中藥高、中劑量組具有明顯差異性(P0.05);與西藥組相比,中藥各組卵巢中SCFm RNA的相對表達低于西藥組,其中藥低劑量組具有明顯差異性(P0.05);中藥各組之間同比,無明顯差異性(P0.05)。結論:1.采用CTX行腹腔一次性注射的方法可復制雌鼠卵巢儲備功能下降模型。2.歸腎丸可有效提高DOR模型小鼠血清AMH及E2水平、降低血清FSH水平。3.歸腎丸可增強卵巢內GDF-9、BPM-15、SCF的mRNA的表達,調整其卵母細胞與顆粒細胞之間的“對話”,啟動原始卵泡的發(fā)育,提高卵巢儲備功能。
【關鍵詞】：歸腎丸 卵巢儲備功能下降 卵巢功能影響 動物實驗
【學位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R285.5;R-332
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-14
• 縮略詞表14-15
• 前言15-19
• 參考文獻18-19
• 第一部分 理論研究19-26
• 一．卵巢儲備功能下降的中醫(yī)診治研究19-24
• 1. 病因病機19-21
• 2. 中醫(yī)論治21-24
• 參考文獻24-26
• 第二部分 實驗研究26-59
• 實驗一 DOR模型小鼠的建立26-34
• 1.材料26
• 2.方法26-28
• 3.結果28
• 4.討論28-31
• 參考文獻31-34
• 實驗二 歸腎丸對模型小鼠卵巢功能的影響34-47
• 1.材料34-36
• 2.方法36-39
• 3.結果39-42
• 4.討論42-45
• 參考文獻45-47
• 實驗三 卵巢中GDF-9、BPM-15、SCF的mRNA各組含量的比較47-59
• 1.材料47-48
• 2.方法48-52
• 3.結果52-55
• 4.討論55-57
• 參考文獻57-59
• 第三部分 討論59-68
• 一. 歸腎丸立方依據(jù)淺析59
• 二. 歸腎丸立方特色淺析59-62
• 三. 歸腎丸中的方藥淺析62-65
• 參考文獻65-68
• 第四部分 結語68-70
• 一. 研究結論68
• 二. 新穎點68-69
• 三. 不足及展望69-70
• 附錄 1 文獻綜述 相關細胞因子維持卵泡靜息狀態(tài)的研究進展70-79
• 參考文獻75-79
• 附錄 2 BALB/c小鼠的陰道涂片79-80
• 附錄 3 HE卵巢組織切片80-81
• 附錄 4 在學期間發(fā)表論文、科研、交流學習及獲獎情況81-82
• 一． 在學校期間發(fā)表的論文81
• 二．在學期間參與科研情況81-82
• 致謝82

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  本文關鍵詞：歸腎丸對DOR模型小鼠卵巢功能影響的實驗研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：447590