本文關(guān)鍵詞：人上皮間質(zhì)相互作用蛋白1參與白介素28A介導(dǎo)的抗病毒過程，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：丙型肝炎病毒(HCV)為單股正鏈RNA病毒,感染了全世界約1.7億人,可導(dǎo)致慢性肝炎、肝硬化、肝癌等嚴(yán)重的肝臟疾病。以往的報(bào)道已經(jīng)證實(shí)IFN-λs能夠在體外抑制HCV的復(fù)制,但是關(guān)于具體的機(jī)制IL-28A是如何進(jìn)行抗病毒尚未可知,并且IL-28A誘導(dǎo)基因的功能也不是全部都了解的很清楚。在本課題中,我們發(fā)現(xiàn)IL-28A可以在全長(zhǎng)復(fù)制子細(xì)胞系和病毒感染肝癌細(xì)胞系中抑制HCV復(fù)制。可以顯著的抑制病毒的復(fù)制、組裝、釋放等生活周期,但對(duì)病毒的入侵沒有影響。IL-28A和IFN-α誘導(dǎo)基因表達(dá)的時(shí)間點(diǎn)不同,IFN-α處理較短時(shí)間,誘導(dǎo)的基因表達(dá)水平就達(dá)到頂峰。但I(xiàn)L-28A處理較長(zhǎng)時(shí)間后,誘導(dǎo)的基因表達(dá)水平才達(dá)到頂峰。兩種干擾素聯(lián)合使用后,對(duì)病毒的抑制水平、STATs蛋白磷酸化水平和激活基因的表達(dá)水平都比任何一種干擾素單獨(dú)使用時(shí)高。這些都說明兩種干擾素具有協(xié)同抗病毒作用。人上皮間質(zhì)相互作用蛋白1(EPSTI1),是一種IL-28A誘導(dǎo)的干擾素誘導(dǎo)基因,在IL-28A介導(dǎo)的抗病毒活動(dòng)中起到了非常重要的作用。在沒有干擾素處理的情況下,EPSTI1的表達(dá)可以抑制病毒的復(fù)制,而沉默EPSTI1會(huì)促進(jìn)病毒的增長(zhǎng)。并且EPSTI1選擇性的抑制HCV的復(fù)制,對(duì)其它生活周期沒有顯著影響。EPSTI1能夠激活PKR的啟動(dòng)子,并且誘導(dǎo)許多PKR依賴的早期ISGs的表達(dá),如IFN-β、IFIT1、OAS1和RNase L。EPSTI1通過激活PKR依賴的信號(hào)途徑起到抗病毒的作用。這些結(jié)果暗示了在IL-28A的抗病毒過程中EPSTI1主要通過激活PKR依賴的基因起作用。
【關(guān)鍵詞】：丙型肝炎病毒 IL-28A 病毒復(fù)制 ISG EPSTI1 PKR
【學(xué)位授予單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R373.21
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-9
• 第1章 緒論9-14
• 1.1 丙型肝炎病毒概述9-12
• 1.1.1 丙型肝炎病毒9-10
• 1.1.2 HCV病毒的傳播10-12
• 1.2 EPSTI1蛋白12-13
• 1.3 本課題研究思路及意義13-14
• 第2章 IL-28A對(duì)HCV的生活周期的影響14-28
• 2.1 前言14
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料14-15
• 2.2.1 試劑與耗材14
• 2.2.2 儀器與設(shè)備14-15
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法15-24
• 2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)15-17
• 2.3.2 轉(zhuǎn)染sh RNA質(zhì)粒以及其它質(zhì)粒17
• 2.3.3 RNA提取17-18
• 2.3.4 逆轉(zhuǎn)錄PCR（Invitrogen試劑盒）18-19
• 2.3.5 熒光定量PCR （SYBR Green法）19-20
• 2.3.6 蛋白質(zhì)的提取20
• 2.3.7 蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定（Bio-Rad試劑盒）20
• 2.3.8 蛋白免疫印跡（Western Blot）20-22
• 2.3.9 熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)22-23
• 2.3.10 免疫熒光檢測(cè)HCV23-24
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-26
• 2.4.1 IL-28A對(duì)HCV復(fù)制的影響24
• 2.4.2 IL-28A對(duì)HCV其它生活周期的影響24-26
• 2.5 小結(jié)與結(jié)論26-28
• 第3章 IL-28A和IFN-α 可以協(xié)同抑制HCV復(fù)制28-37
• 3.1 前言28
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料28-29
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑與耗材28
• 3.2.2 儀器與設(shè)備28-29
• 3.3 試驗(yàn)方法29-34
• 3.3.1 引物設(shè)計(jì)29-30
• 3.3.2 RNA的提取30-31
• 3.3.3 蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定（Bio-Rad 試劑盒）31
• 3.3.4 蛋白免疫印跡（Western Blot）31-33
• 3.3.5 免疫熒光檢測(cè) HCV33-34
• 3.4 結(jié)果34-36
• 3.4.1 IL-28A和IFN-α 能夠聯(lián)合抗病毒34
• 3.4.2 IL-28A和IFN-α 能夠聯(lián)合增強(qiáng)JAK-STAT信號(hào)通路34-35
• 3.4.3 IL-28A和IFN-α 能夠聯(lián)合增強(qiáng)ISGs的表達(dá)35-36
• 3.5 小結(jié)與討論36-37
• 第4章 EPSTI1的抗病功能依賴于PKR37-49
• 4.1 前言37
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料37-38
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑和耗材37
• 4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備37-38
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法38-43
• 4.3.1 EPSTI1過表達(dá)載體質(zhì)粒的制備38-39
• 4.3.2 特異性EPSTI1-sh RNA的制備39-40
• 4.3.3 轉(zhuǎn)化體系所需40-41
• 4.3.4 連接體系的轉(zhuǎn)化41
• 4.3.5 質(zhì)粒小提（QIAGEN試劑盒）和鑒定41-42
• 4.3.6 DNA提取42-43
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-48
• 4.4.1 EPSTI1的抗病毒功能43-45
• 4.4.2 EPSTI1通過PKR信號(hào)通路起到抑制HCV復(fù)制的作用45-47
• 4.4.3 EPSTI1是通過激活PKR的啟動(dòng)子來提高PKR的表達(dá)的47-48
• 4.5 小結(jié)與結(jié)論48-49
• 結(jié)論與展望49-51
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 附錄 攻讀碩士學(xué)位期間參與發(fā)表論文和專利57-58
• 致謝58

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 申景平;研制更好的抗病毒藥物[J];國(guó)外科技動(dòng)態(tài);2002年03期

2 王長(zhǎng)云,管華詩(shī);多糖抗病毒作用研究進(jìn)展Ⅰ.多糖抗病毒作用[J];生物工程進(jìn)展;2000年01期

3 劉煜婷;白全宏;;有關(guān)生物制藥領(lǐng)域中抗病毒藥物的發(fā)展現(xiàn)狀[J];黑龍江科技信息;2009年20期

4 林秀云,鄭啟泰,沈福嶺,王琳,趙知中;抗病毒新藥酞丁安晶體結(jié)構(gòu)研究[J];科學(xué)通報(bào);1988年18期

5 吳章琦;;第四屆國(guó)際抗病毒會(huì)議[J];中國(guó)病毒學(xué);1991年04期

6 符立梧;潘啟超;;抗病毒藥物作用機(jī)制研究新進(jìn)展[J];廣東科技;1994年11期

7 Andrew Pollack ,余家駒;“非典”引發(fā)的抗病毒競(jìng)賽[J];世界科學(xué);2003年07期

8 劉麗軍,李光譜,張雪梅,石曉麗,盛軍;聚乙二醇化干擾素的抗病毒和抗腫瘤活性的研究[J];微生物學(xué)雜志;2004年05期

9 張國(guó)紅;中藥抗病毒研究進(jìn)展[J];中外技術(shù)情報(bào);1996年10期

10 宋媛媛;佟澤勇;;有關(guān)生物制藥領(lǐng)域中抗病毒藥物的發(fā)展現(xiàn)狀[J];黑龍江科技信息;2011年24期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王融冰;孫鳳霞;江宇泳;周桂琴;王曉靜;司馬奮強(qiáng);;慢性乙型重型肝炎的抗病毒治療[A];全國(guó)第3屆中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)傳染病專業(yè)委員會(huì)第2屆委員會(huì)議論文匯編[C];2010年

2 劉濤;張春梅;辛艷春;;慢性乙型病毒性肝炎治療的再思考:抑制、清除或耐受?[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十六次全國(guó)病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

3 陳本川;;抗病毒藥物研究進(jìn)展[A];現(xiàn)代科技與湖北新型工業(yè)化——第二屆湖北科技論壇優(yōu)秀論文集[C];2003年

4 周黎明;;抗病毒藥物研究進(jìn)展[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)化療藥理專業(yè)委員會(huì)第九屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2008年

5 岑山;;新型抗病毒藥物的研究策略[A];第二屆全國(guó)微生物資源學(xué)術(shù)暨國(guó)家微生物資源平臺(tái)運(yùn)行服務(wù)研討會(huì)論文摘要集[C];2010年

6 李惠聰;;乙肝患者抗病毒治療中的需求及護(hù)理[A];2007年“中國(guó)護(hù)理事業(yè)發(fā)展”論壇論文匯編[C];2007年

7 楊炯;;淺析乙肝免疫辯證抗病毒“三結(jié)合”治療方案[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)第十二屆內(nèi)科肝膽病學(xué)術(shù)會(huì)議暨第四次國(guó)家中醫(yī)肝病重點(diǎn)�？茀f(xié)作組學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

8 曹彬;;流感抗病毒治療與病毒耐藥[A];第二屆全國(guó)藥物性損害與安全用藥學(xué)術(shù)會(huì)議——抗感染藥物不良反應(yīng)與臨床安全應(yīng)用專題研討會(huì)論文匯編[C];2010年

9 陳本川;;抗病毒藥物的現(xiàn)狀及研究進(jìn)展[A];二○○三年全國(guó)醫(yī)藥工業(yè)技術(shù)工作年會(huì)專題報(bào)告匯編[C];2003年

10 蔡步林;李卓榮;;抗病毒藥物的研究開發(fā)策略[A];2006年全國(guó)生化與生物技術(shù)藥物學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 本報(bào)記者 葛密艷 劉永斌;抗病毒獸藥被禁之后[N];河北科技報(bào);2006年

2 王立峰;抗病毒藥物市場(chǎng)概況（二）[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2002年

3 記者 孫夢(mèng);重點(diǎn)人群應(yīng)48小時(shí)內(nèi)使用抗病毒藥物[N];健康報(bào);2013年

4 記者 伍江 特約通訊員 陳玉川;我市未現(xiàn)搶購(gòu)抗病毒藥物風(fēng)潮[N];湛江日?qǐng)?bào);2013年

5 白愛芹 王宗芹;抗病毒藥物的研究[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2003年

6 金山;抗病毒類藥市場(chǎng)解密[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

7 本報(bào)記者 鐘可芬;終端抗病毒藥物做足功課[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2009年

8 記者 李穎;抗擊慢乙須重視抗病毒[N];科技日?qǐng)?bào);2012年

9 本報(bào)記者 陳國(guó)東;抗病毒藥物生產(chǎn)提前備戰(zhàn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2009年

10 劉士敬;乙肝抗病毒治療為何難以實(shí)施？[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2005年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 高帥;用于指導(dǎo)慢性乙型肝炎患者抗病毒治療的無創(chuàng)性模型研究[D];山東大學(xué);2015年

2 朱偉偉;模式識(shí)別受體介導(dǎo)的小鼠睪丸和附睪的天然抗病毒反應(yīng)[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

3 張渝婧;柳州市HIV單陽(yáng)家庭流行病學(xué)特征及基于抗病毒治療的預(yù)防性服藥意愿研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

4 孔令娜;慢性乙型肝炎抗病毒治療患者自我管理量表的編制及初步應(yīng)用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

5 包木勝;新型CpG ODN大規(guī)模篩選及其抗病毒作用的研究[D];吉林大學(xué);2005年

6 臧春鵬;抗病毒治療對(duì)艾滋病傳播流行的影響[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2011年

7 邱倩;北京市新醫(yī)療保險(xiǎn)政策實(shí)施后慢性乙型肝炎病人不同抗病毒治療方案比較效果研究及衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)學(xué)評(píng)價(jià)[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

8 馬燁;我國(guó)8省成人艾滋病人長(zhǎng)期一線抗病毒治療效果及影響因素研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2012年

9 魏艷紅;抗病毒藥物制備、篩選、藥效學(xué)評(píng)估及抗EV71研究[D];武漢大學(xué);2013年

10 賈紅偉;鏈霉菌1948發(fā)酵液中抗病毒活性成分的提取分離、結(jié)構(gòu)測(cè)定及抗病毒作用的研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1998年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊文杰;2005~2014年河南省艾滋病患者抗病毒治療后生存及影響因素分析[D];鄭州大學(xué);2015年

2 錢鈺;慢性HBV感染患者腎小球?yàn)V過率估計(jì)值（eGFR）測(cè)定及其與抗病毒治療藥物的關(guān)系[D];山東大學(xué);2015年

3 黃琴;上海市艾滋病患者抗病毒治療療效研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 張雙;中國(guó)云南省艾滋病患者二線抗病毒治療臨床轉(zhuǎn)歸的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2015年

5 劉紅玲;TACE聯(lián)合抗病毒治療乙肝相關(guān)性肝癌的療效觀察[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

6 王英;CTL-DC輔助慢性乙型肝炎抗病毒治療的相關(guān)研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2015年

7 陳飛;薄荷抗呼吸道合胞病毒的有效物質(zhì)基礎(chǔ)研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2015年

8 楊旭;雞肉中多殘留檢測(cè)方法的研究以及金剛烷胺、利巴韋林標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制[D];福建農(nóng)林大學(xué);2016年

9 萬(wàn)羽;基于復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)的抗病毒治療的流感傳播模型[D];南京理工大學(xué);2016年

10 李翠玉;抗菌/抗病毒環(huán)糊精包合物的制備及其在紙頁(yè)中的應(yīng)用[D];華南理工大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：人上皮間質(zhì)相互作用蛋白1參與白介素28A介導(dǎo)的抗病毒過程，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：445807