本文關(guān)鍵詞：人上皮間質(zhì)相互作用蛋白1參與白介素28A介導(dǎo)的抗病毒過程，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：丙型肝炎病毒(HCV)為單股正鏈RNA病毒,感染了全世界約1.7億人,可導(dǎo)致慢性肝炎、肝硬化、肝癌等嚴(yán)重的肝臟疾病。以往的報道已經(jīng)證實IFN-λs能夠在體外抑制HCV的復(fù)制,但是關(guān)于具體的機制IL-28A是如何進(jìn)行抗病毒尚未可知,并且IL-28A誘導(dǎo)基因的功能也不是全部都了解的很清楚。在本課題中,我們發(fā)現(xiàn)IL-28A可以在全長復(fù)制子細(xì)胞系和病毒感染肝癌細(xì)胞系中抑制HCV復(fù)制。可以顯著的抑制病毒的復(fù)制、組裝、釋放等生活周期,但對病毒的入侵沒有影響。IL-28A和IFN-α誘導(dǎo)基因表達(dá)的時間點不同,IFN-α處理較短時間,誘導(dǎo)的基因表達(dá)水平就達(dá)到頂峰。但I(xiàn)L-28A處理較長時間后,誘導(dǎo)的基因表達(dá)水平才達(dá)到頂峰。兩種干擾素聯(lián)合使用后,對病毒的抑制水平、STATs蛋白磷酸化水平和激活基因的表達(dá)水平都比任何一種干擾素單獨使用時高。這些都說明兩種干擾素具有協(xié)同抗病毒作用。人上皮間質(zhì)相互作用蛋白1(EPSTI1),是一種IL-28A誘導(dǎo)的干擾素誘導(dǎo)基因,在IL-28A介導(dǎo)的抗病毒活動中起到了非常重要的作用。在沒有干擾素處理的情況下,EPSTI1的表達(dá)可以抑制病毒的復(fù)制,而沉默EPSTI1會促進(jìn)病毒的增長。并且EPSTI1選擇性的抑制HCV的復(fù)制,對其它生活周期沒有顯著影響。EPSTI1能夠激活PKR的啟動子,并且誘導(dǎo)許多PKR依賴的早期ISGs的表達(dá),如IFN-β、IFIT1、OAS1和RNase L。EPSTI1通過激活PKR依賴的信號途徑起到抗病毒的作用。這些結(jié)果暗示了在IL-28A的抗病毒過程中EPSTI1主要通過激活PKR依賴的基因起作用。
【關(guān)鍵詞】：丙型肝炎病毒 IL-28A 病毒復(fù)制 ISG EPSTI1 PKR
【學(xué)位授予單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R373.21
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-9
• 第1章 緒論9-14
• 1.1 丙型肝炎病毒概述9-12
• 1.1.1 丙型肝炎病毒9-10
• 1.1.2 HCV病毒的傳播10-12
• 1.2 EPSTI1蛋白12-13
• 1.3 本課題研究思路及意義13-14
• 第2章 IL-28A對HCV的生活周期的影響14-28
• 2.1 前言14
• 2.2 實驗材料14-15
• 2.2.1 試劑與耗材14
• 2.2.2 儀器與設(shè)備14-15
• 2.3 實驗方法15-24
• 2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)15-17
• 2.3.2 轉(zhuǎn)染sh RNA質(zhì)粒以及其它質(zhì)粒17
• 2.3.3 RNA提取17-18
• 2.3.4 逆轉(zhuǎn)錄PCR（Invitrogen試劑盒）18-19
• 2.3.5 熒光定量PCR （SYBR Green法）19-20
• 2.3.6 蛋白質(zhì)的提取20
• 2.3.7 蛋白質(zhì)濃度的測定（Bio-Rad試劑盒）20
• 2.3.8 蛋白免疫印跡（Western Blot）20-22
• 2.3.9 熒光素酶報告基因檢測22-23
• 2.3.10 免疫熒光檢測HCV23-24
• 2.4 實驗結(jié)果24-26
• 2.4.1 IL-28A對HCV復(fù)制的影響24
• 2.4.2 IL-28A對HCV其它生活周期的影響24-26
• 2.5 小結(jié)與結(jié)論26-28
• 第3章 IL-28A和IFN-α 可以協(xié)同抑制HCV復(fù)制28-37
• 3.1 前言28
• 3.2 實驗材料28-29
• 3.2.1 實驗試劑與耗材28
• 3.2.2 儀器與設(shè)備28-29
• 3.3 試驗方法29-34
• 3.3.1 引物設(shè)計29-30
• 3.3.2 RNA的提取30-31
• 3.3.3 蛋白質(zhì)濃度的測定（Bio-Rad 試劑盒）31
• 3.3.4 蛋白免疫印跡（Western Blot）31-33
• 3.3.5 免疫熒光檢測 HCV33-34
• 3.4 結(jié)果34-36
• 3.4.1 IL-28A和IFN-α 能夠聯(lián)合抗病毒34
• 3.4.2 IL-28A和IFN-α 能夠聯(lián)合增強JAK-STAT信號通路34-35
• 3.4.3 IL-28A和IFN-α 能夠聯(lián)合增強ISGs的表達(dá)35-36
• 3.5 小結(jié)與討論36-37
• 第4章 EPSTI1的抗病功能依賴于PKR37-49
• 4.1 前言37
• 4.2 實驗材料37-38
• 4.2.1 實驗試劑和耗材37
• 4.2.2 實驗儀器與設(shè)備37-38
• 4.3 實驗方法38-43
• 4.3.1 EPSTI1過表達(dá)載體質(zhì)粒的制備38-39
• 4.3.2 特異性EPSTI1-sh RNA的制備39-40
• 4.3.3 轉(zhuǎn)化體系所需40-41
• 4.3.4 連接體系的轉(zhuǎn)化41
• 4.3.5 質(zhì)粒小提（QIAGEN試劑盒）和鑒定41-42
• 4.3.6 DNA提取42-43
• 4.4 實驗結(jié)果43-48
• 4.4.1 EPSTI1的抗病毒功能43-45
• 4.4.2 EPSTI1通過PKR信號通路起到抑制HCV復(fù)制的作用45-47
• 4.4.3 EPSTI1是通過激活PKR的啟動子來提高PKR的表達(dá)的47-48
• 4.5 小結(jié)與結(jié)論48-49
• 結(jié)論與展望49-51
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 附錄 攻讀碩士學(xué)位期間參與發(fā)表論文和專利57-58
• 致謝58

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本文編號：445807