本文關(guān)鍵詞：類泛素折疊修飾蛋白在內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本研究旨在探討類泛素折疊修飾蛋白Ufm1在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的表達(dá)及作用,并進(jìn)一步探討其可能的分子機(jī)制。方法:免疫熒光法觀察Ufm1在內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)和定位。使用濃度為100ng/ml的脂多糖LPS體外處理人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系HUVECs,分別刺激0h、3h、6h、12h、24h、48h后,采用Real-Time PCR檢測(cè)炎性細(xì)胞因子(TNFα、IL-6、IL-1β、IL-12、MCP-1)和Ufm1的m RNA水平,同時(shí)通過(guò)Western blotting檢測(cè)Ufm1蛋白水平的變化。另外,構(gòu)建Ufm1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染質(zhì)粒至HUVECs,經(jīng)LPS刺激3h后,采用Real-Time PCR檢測(cè)各組中上述炎性細(xì)胞因子的變化。Western blotting法檢測(cè)NF-κB的總蛋白表達(dá)量及其入核量,以探討Ufm1抑制HUVECs炎性細(xì)胞因子表達(dá)的可能分子機(jī)制。結(jié)果:Ufm1蛋白在HUVECs的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá)。在LPS誘導(dǎo)HUVECs炎癥反應(yīng)中,主要炎性細(xì)胞因子TNFα、IL-6、IL-1β、IL-12、MCP-1的m RNA水平隨著時(shí)間變化而升高,并且在刺激后3-6h達(dá)到高峰,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。同時(shí),Ufm1的m RNA水平和蛋白表達(dá)量也隨著時(shí)間的變化而上調(diào),且具有時(shí)間依賴性。過(guò)表達(dá)Ufm1后,LPS誘導(dǎo)產(chǎn)生的相關(guān)炎性細(xì)胞因子表達(dá)量顯著降低。與對(duì)照組相比,Toll樣受體通路中NF-κB P65在LPS刺激后入核增多,但過(guò)表達(dá)Ufm1后p65入核減少。結(jié)論:Ufm1在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVECs中存在表達(dá),并定位于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì);在LPS誘導(dǎo)的HUVECs炎癥反應(yīng)中,Ufm1的m RNA及蛋白水平均上調(diào);Ufm1過(guò)表達(dá)可顯著抑制LPS誘導(dǎo)的HUVECs炎性細(xì)胞因子的表達(dá);Ufm1可能通過(guò)TLR4-NF-κB信號(hào)通路發(fā)揮抑制內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的作用。
【關(guān)鍵詞】：類泛素折疊修飾蛋白 脂多糖 炎癥反應(yīng) NF-?B 動(dòng)脈粥樣硬化
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R364.5
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-8
• 引言8-13
• 材料與方法13-28
• 1.1 試劑和儀器13-15
• 1.1.1 細(xì)胞13
• 1.1.2 主要試劑13-14
• 1.1.3 主要儀器14-15
• 1.2 主要試驗(yàn)方法15-27
• 1.2.1 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系HUVECs的培養(yǎng)15-16
• 1.2.2 細(xì)胞免疫熒光16-17
• 1.2.3 Ufm1質(zhì)粒的擴(kuò)增、抽提及純化17-19
• 1.2.4 HUVECs細(xì)胞干預(yù)實(shí)驗(yàn)19-20
• 1.2.5 Real-time PCR檢測(cè)HUVECs目的基因的表達(dá)20-22
• 1.2.6 Western blotting檢測(cè)HUVECs目的蛋白的表達(dá)22-25
• 1.2.7 核質(zhì)分離試劑盒檢測(cè)NF-kB的表達(dá)分布25-27
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法27-28
• 結(jié)果28-36
• 討論36-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 致謝44-45
• 附錄A45-46
• 附錄B46

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：442352