本文關(guān)鍵詞：胚胎期小鼠耳周間充質(zhì)差異表達(dá)基因的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:利用基因芯片技術(shù)檢測(cè)內(nèi)耳發(fā)育過(guò)程中耳周間充質(zhì)差異表達(dá)的基因并鑒定其表達(dá),篩選促進(jìn)耳蝸感覺(jué)前體細(xì)胞增殖分化的關(guān)鍵基因。方法:利用Mouse TGF?/BMP Signaling Pathway基因芯片檢測(cè)E12.5、E13.5及新生鼠耳蝸感覺(jué)上皮緊鄰的間充質(zhì)的差異表達(dá)基因,應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR對(duì)部分差異表達(dá)基因(Mecom、Cdkn2b、Ltbp2、Tgfb2)進(jìn)一步驗(yàn)證,應(yīng)用免疫熒光標(biāo)記技術(shù)檢測(cè)Mecom蛋白在內(nèi)耳早期發(fā)育中的時(shí)空表達(dá)模式。結(jié)果:1.基因芯片篩選耳周間充質(zhì)差異表達(dá)基因結(jié)果發(fā)現(xiàn)E13.5比E12.5樣本具有明顯差異表達(dá)的基因有11個(gè),其中有6個(gè)基因顯著上調(diào)(Cdkn2b、Fos、Gsc、Herpud1、Tgfb1、Tgfb2),5個(gè)基因顯著下調(diào)(Bmpr1b、Fst、Gdf3、Mecom、Tgfbr1)(差異倍數(shù)均在2倍以上)。其中Gdf3基因表達(dá)量E13.5比E12.5樣本下降2.13倍,但p=0.44,沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。其余10個(gè)基因均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。新生鼠比E12.5樣本具有明顯差異表達(dá)的基因有35個(gè),其中有25個(gè)基因顯著上調(diào),10個(gè)基因顯著下調(diào)(差異倍數(shù)均在2倍以上)。其中Col1al、Igfbp3、Il6、Gdf2、Gdf7、Nodal、Serpine基因雖然差異倍數(shù)均在2倍以上,但p值均大于0.05,沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。其余28個(gè)基因p0.05,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.Real Time PCR驗(yàn)證分析E12.5、E13.5和新生鼠耳周間充質(zhì)樣本中部分差異表達(dá)基因(Mecom、Cdkn2b、Ltbp2、Tgfb2)水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn):Cdkn2b、Ltbp2、Tgfb2三個(gè)基因E13.5比E12.5、新生鼠比E12.5及新生鼠比E13.5的基因表達(dá)水平明顯上調(diào),與基因芯片的篩選結(jié)果一致,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。Mecom基因E13.5比E12.5、新生鼠比E12.5、新生鼠比E13.5的基因表達(dá)水平明顯下調(diào),與基因芯片的篩選結(jié)果一致,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。3.Mecom蛋白在小鼠內(nèi)耳早期發(fā)育中的表達(dá)模式在E10.5,Mecom廣泛表達(dá)在聽(tīng)泡周?chē)g充質(zhì)及耳蝸前庭神經(jīng)節(jié),在聽(tīng)泡區(qū)域有弱表達(dá)。隨后,在內(nèi)耳感覺(jué)上皮的表達(dá)進(jìn)一步變?nèi)?到E13.5基本局限在耳周間充質(zhì)及部分螺旋神經(jīng)節(jié)及前庭神經(jīng)節(jié)。Sox2開(kāi)始在聽(tīng)泡區(qū)及神經(jīng)節(jié)均有表達(dá),隨后在腹內(nèi)側(cè)表達(dá)逐漸減弱,隨著前感覺(jué)區(qū)及感覺(jué)區(qū)的形成,逐漸局限在感覺(jué)細(xì)胞及耳蝸前庭神經(jīng)節(jié)。結(jié)論:小鼠內(nèi)耳發(fā)育過(guò)程中耳周間充質(zhì)基因表達(dá)存在差異,其差異可能與內(nèi)耳感覺(jué)前體細(xì)胞增殖分化能力不同密切相關(guān),分析這些表達(dá)存在顯著差異的基因有助于我們了解內(nèi)耳發(fā)育機(jī)制,為毛細(xì)胞再生的研究提供線索。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì) 毛細(xì)胞 基因芯片 差異表達(dá) 基因
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R321.5
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照表5-7
• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-14
• 研究材料（資料與內(nèi)容）與方法14-31
• 1. 研究?jī)?nèi)容14
• 1.1 利用基因芯片技術(shù)篩選小鼠耳周間充質(zhì)差異表達(dá)的基因14
• 1.2 應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證小鼠耳周間充質(zhì)表達(dá)顯著差異的基因14
• 1.3 Mecom蛋白在小鼠內(nèi)耳早期發(fā)育中的表達(dá)模式14
• 2. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和材料14-19
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物14
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料14-18
• 2.3 實(shí)驗(yàn)主要儀器18-19
• 3. 主要實(shí)驗(yàn)方法19-31
• 3.1 間充質(zhì)提取19-20
• 3.2 小鼠耳蝸冰凍切片制作20-21
• 3.3 免疫組織化學(xué)熒光染色21
• 3.4 PCR Assay實(shí)驗(yàn)操作步驟21-27
• 3.5 Real Time PCR（RT-PCR）27-31
• 結(jié)果31-40
• 討論40-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-55
• 綜述 PRDM 蛋白：信號(hào)傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的分子機(jī)制55-73
• 參考文獻(xiàn)64-73
• 作者簡(jiǎn)介及讀研期間主要科研成果73-74
• 致謝74

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 劉少鋒,周梁,李華偉,沈云珍;胚胎小鼠耳蝸感覺(jué)上皮的形態(tài)發(fā)生[J];中國(guó)耳鼻咽喉頭頸外科;2005年07期

  本文關(guān)鍵詞：胚胎期小鼠耳周間充質(zhì)差異表達(dá)基因的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：442438