本文關(guān)鍵詞：MALAT1在LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中的功能與機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：越來(lái)越多的研究結(jié)果顯示長(zhǎng)鏈非編碼RNA在許多生理和病理過(guò)程中發(fā)揮非常重要的作用。MALAT1是一個(gè)在哺乳動(dòng)物高度保守的lncRNA,主要與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān),目前不清楚它是否參與免疫反應(yīng)。本課題旨在揭示MALAT1在炎癥應(yīng)答反應(yīng)中的作用及機(jī)制,進(jìn)一步豐富lncRNA在炎癥反應(yīng)中的調(diào)控作用。方法：為了驗(yàn)證MALAT1在炎癥反應(yīng)中的作用,我們主要以PMA誘導(dǎo)分化的THP-1巨噬細(xì)胞為研究對(duì)象,qPCR檢測(cè)了經(jīng)TLR4 (Toll-like receptor 4)配體LPS (Lipopolysaccharide)刺激后THP-1巨噬細(xì)胞中MALAT1的表達(dá)變化。我們通過(guò)qPCR及ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了siRNA敲減MALAT1后對(duì)炎癥因子TNFαβIL-6和IL-1p表達(dá)的影響。我們進(jìn)行了NF-κB報(bào)告基因?qū)嶒?yàn),檢測(cè)MALAT1對(duì)NF-κB活性的影響。通過(guò)qPCR以及Western blot檢測(cè)了MALAT1對(duì)p50、p65表達(dá)豐度的影響以及ChlP-qPCR檢測(cè)了敲減MALAT1對(duì)NF-κB與靶基因TNFα、IL-6和IL-1p啟動(dòng)子結(jié)合的影響來(lái)確定MALAT1調(diào)節(jié)NF-κB活性的機(jī)制。通過(guò)RIP實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了MALAT1與NF-κB的結(jié)合情況。為了驗(yàn)證NF-κB對(duì)MALAT1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,我們做了NF-κB抑制劑實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了NF-κB對(duì)LPS誘導(dǎo)的MALAT1表達(dá)的作用。通過(guò)構(gòu)建MALAT1不同啟動(dòng)子片段的報(bào)告質(zhì)粒以及候選NF-κB位點(diǎn)突變質(zhì)粒進(jìn)行報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證MALAT1啟動(dòng)子上是否存在NF-κB結(jié)合位點(diǎn)。最終通過(guò)ChIP檢測(cè)NF-κB與MALAT1啟動(dòng)子的結(jié)合。結(jié)果：我們發(fā)現(xiàn)LPS能夠誘導(dǎo)MALAT1的表達(dá),此外siRNA敲減MALAT1后促進(jìn)了炎癥因子TNFα、IL-6的表達(dá),而對(duì)IL-1β的表達(dá)沒(méi)有影響。NF-κB報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示MALAT1能夠抑制NF-κB活性。然而,我們發(fā)現(xiàn)MALAT1不影響p50和p65的表達(dá)豐度。通過(guò)ChIP,RIP實(shí)驗(yàn)以及對(duì)MALAT1在細(xì)胞中分布情況的分析,我們發(fā)現(xiàn)MALAT1在細(xì)胞核中與NF-κB的亞基p50、p65結(jié)合,抑制了NF-κB與TNFα和IL-6啟動(dòng)子的結(jié)合。此外,我們發(fā)現(xiàn)NF-κB的抑制劑抑制了LPS誘導(dǎo)的MALAT1轉(zhuǎn)錄,暗示LPS誘導(dǎo)的MALAT1的轉(zhuǎn)錄依賴(lài)于NF-κB。我們還在MALAT1啟動(dòng)子上確認(rèn)了一個(gè)NF-κB的保守結(jié)合位點(diǎn)。ChIP-qPCR實(shí)驗(yàn)證明了NF-κB與MALAT1啟動(dòng)子結(jié)合,表明NF-κB對(duì)MALAT1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。結(jié)論：我們發(fā)現(xiàn)LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞中MALAT1的表達(dá),并發(fā)現(xiàn)MALAT1通過(guò)結(jié)合NF-κB亞基P50、p65抑制NF-κB與靶基因啟動(dòng)子的結(jié)合,最終抑制TNFαβIL-6的表達(dá)。此外LPS誘導(dǎo)的MALAT1的表達(dá)也受到NF-κB的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。因此MALAT1是NF-κB活性的負(fù)反饋調(diào)控因子,幫助嚴(yán)格調(diào)控TLR信號(hào)通路,避免過(guò)度的炎癥反應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：長(zhǎng)鏈非編碼RNA MALAT1 固有免疫 NF-κB 炎癥
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R363
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-11
• 主要英文縮略詞11-12
• 前言12-13
• 文獻(xiàn)綜述 長(zhǎng)鏈非編碼RNA在免疫反應(yīng)中的研究進(jìn)展13-24
• 1. LncRNA的簡(jiǎn)介13-14
• 2. LncRNA的作用機(jī)制14-16
• 2.1 LncRNA在表觀(guān)遺傳水平調(diào)控基因的表達(dá)15
• 2.2 LncRNA在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控基因的表達(dá)15
• 2.3 LncRNA在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因的表達(dá)15-16
• 3. LncRNA與免疫細(xì)胞的分化與成熟16-18
• 3.1 LncRNA與T淋巴細(xì)胞16-17
• 3.2 LncRNA與B淋巴細(xì)胞17
• 3.3 LncRNA與樹(shù)突狀細(xì)胞17-18
• 3.4 LncRNA與粒細(xì)胞18
• 3.5 LncRNA與巨噬細(xì)胞18
• 4. LncRNA與免疫反應(yīng)18-21
• 4.1 LncRNA與固有免疫反應(yīng)18-20
• 4.2 LncRNA與適應(yīng)性免疫20-21
• 4.3 LncRNA與抗病毒免疫21
• 5. LncRNA與免疫疾病21-23
• 5.1 LncRNA與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎21-22
• 5.2 LncRNA與川崎病22
• 5.3 LncRNA與系統(tǒng)性紅斑狼瘡22-23
• 5.4 LncRNA與甲型流感23
• 6. 總結(jié)與展望23-24
• 第一章 材料與方法24-38
• 1. 材料24-27
• 1.1 細(xì)胞株24
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器24
• 1.3 主要試劑24-25
• 1.4 試劑配制25-27
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法27-38
• 2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)27
• 2.2 LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)27
• 2.3 siRNA轉(zhuǎn)染27-28
• 2.4 總RNA提取與qPCR28-29
• 2.5 ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中的TNFα、IL-6和IL-1β29-30
• 2.6 Western Blot30-31
• 2.7 雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)31
• 2.8 染色質(zhì)免疫共沉淀ChIP31-33
• 2.9 MALAT1啟動(dòng)子報(bào)告基因質(zhì)粒的構(gòu)建33
• 2.10 RNA免疫共沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)33-35
• 2.11 細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)RNA的分離35
• 2.12 DNA-pulldown實(shí)驗(yàn)35
• 2.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析35-38
• 第二章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果38-45
• 1. 與炎癥相關(guān)的lncRNA的篩選38-39
• 2. LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞中MALAT1的表達(dá)39-40
• 3. MALAT1調(diào)節(jié)LPS誘導(dǎo)的炎癥因子的表達(dá)40
• 4. MALAT1抑制NF-κB活性40-42
• 5. MALAT1通過(guò)與NF-κB結(jié)合調(diào)節(jié)炎癥因子的表達(dá)42-43
• 6. LPS誘導(dǎo)的MALAT1的表達(dá)依賴(lài)于NF-κB43-45
• 第三章 討論45-47
• 小結(jié)47-48
• 致謝48-49
• 參考文獻(xiàn)49-55
• 作者簡(jiǎn)介55

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1 ;我國(guó)科學(xué)家發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)人體炎癥反應(yīng)新機(jī)制[J];中國(guó)科技產(chǎn)業(yè);2007年08期

2 ;健康老人抑郁癥狀與炎癥反應(yīng)相關(guān)[J];浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志;2010年04期

3 唐宏;;炎癥反應(yīng) 中國(guó)科學(xué)家談科學(xué)[J];科學(xué)觀(guān)察;2009年04期

4 張熒熒;李淵越;韓家淮;;炎癥反應(yīng),健康衛(wèi)士還是癌癥幫兇?[J];中國(guó)基礎(chǔ)科學(xué);2012年02期

5 ;發(fā)展炎癥反應(yīng)概念——哺乳動(dòng)物抗菌肽及其基因表達(dá)調(diào)控研究[J];中國(guó)病理生理雜志;2001年08期

6 段金成;丁志峰;和紅兵;;炎癥反應(yīng)介質(zhì)對(duì)炎癥影響機(jī)制的探討[J];昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2009年S2期

7 彭代智;;燒傷后炎癥反應(yīng)的病因、分子機(jī)制及防治對(duì)策[J];中華燒傷雜志;2005年06期

8 李成龍;屠偉峰;;炎癥反應(yīng)在胃黏膜防御中的作用[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2008年03期

9 趙紅梅;阮海華;;不同鹽離子對(duì)單核細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年10期

10 吳錦鴻;許國(guó)根;徐芝君;徐遠(yuǎn)勝;顧清;;全身炎癥反應(yīng)綜合征患者血小板活化與炎癥反應(yīng)的相關(guān)性研究[J];全科醫(yī)學(xué)臨床與教育;2011年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 姜勇;;炎癥反應(yīng)的研究現(xiàn)狀與未來(lái)[A];中國(guó)病理生理學(xué)會(huì)受體、腫瘤和免疫專(zhuān)業(yè)委員會(huì)聯(lián)合學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

2 歐陽(yáng)文;何慧娟;王意;;圍術(shù)期炎癥反應(yīng)與術(shù)后認(rèn)知功能障礙(英文)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第二十次全國(guó)麻醉學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2012年

3 張衛(wèi)茹;侯凡凡;劉尚喜;郭志堅(jiān);周展眉;;晚期糖基化終產(chǎn)物增加動(dòng)脈粥樣硬化部位的炎癥反應(yīng)[A];“中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2004年年會(huì)”暨“第二屆全國(guó)中青年腎臟病學(xué)術(shù)會(huì)議”論文匯編[C];2004年

4 濮紅梅;尹忠誠(chéng);劉秉成;李勝開(kāi);馮錦紅;;血液透析患者血清IL-10與炎癥反應(yīng)及營(yíng)養(yǎng)狀況的關(guān)系研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

5 陸志偉;黃慧;姜純國(guó);徐作軍;;輔助性T淋巴細(xì)胞與特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化關(guān)系的初步研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2011（第十二次全國(guó)呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議）論文匯編[C];2011年

6 俞佳;王仲;;內(nèi)源性氣體信號(hào)分子硫化氫與炎癥反應(yīng)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)急診醫(yī)學(xué)分會(huì)第十三次全國(guó)急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)大會(huì)論文集[C];2010年

7 周曉艷;徐營(yíng)營(yíng);謝兆宏;許繼平;畢建忠;;炎癥反應(yīng)與神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病的研究進(jìn)展[A];2011全國(guó)老年癡呆與衰老相關(guān)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議第三屆山東省神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師（學(xué)術(shù)）論壇論文匯編[C];2011年

8 張會(huì)云;崔克亮;曹書(shū)華;;炎癥反應(yīng),凝血機(jī)制與MODS的發(fā)病機(jī)理的關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)急診分會(huì)第五屆全國(guó)危重病學(xué)術(shù)交流會(huì)論文匯編[C];2004年

9 燕艷麗;邱海波;楊毅;許紅陽(yáng);王麗;孫輝明;;急性呼吸窘迫綜合征家兔肺部及肺外器官炎癥反應(yīng)的變化[A];第六屆全國(guó)危重病學(xué)術(shù)交流大會(huì)論文匯編[C];2005年

10 周曉艷;徐營(yíng)營(yíng);謝兆宏;許繼平;畢建忠;;炎癥反應(yīng)與神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病的研究進(jìn)展[A];山東省第三次中西醫(yī)結(jié)合神經(jīng)內(nèi)科學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2011年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊一唯邋記者 王春;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)人體炎癥反應(yīng)新機(jī)制[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

2 王蔚;我國(guó)科學(xué)家發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)人體炎癥反應(yīng)新機(jī)制[N];大眾科技報(bào);2007年

3 記者 徐瑞哲;第三者“插足”抑制炎癥反應(yīng)[N];解放日?qǐng)?bào);2007年

4 記者白毅;炎癥反應(yīng)中淋巴結(jié)重塑新機(jī)制被揭示[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2011年

5 記者 耿挺;尋找炎癥反應(yīng)蛋白[N];上�？萍紙�(bào);2007年

6 信文;“IL-10”蛋白調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

7 知陶;把炎癥反應(yīng)排除在外[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

8 韓秀霞;Capase-12蛋白參與炎癥反應(yīng)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

9 范曉艷;免疫系統(tǒng)“出錯(cuò)” 救星變?yōu)男荹N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

10 高春東;軟組織挫傷用抗生素?zé)o效[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2004年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 段二珍;HMGB1在PRRSV感染中的作用及Glycyrrhizin抗PRRSV活性研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

2 韋超;GIT2抑制TLR介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

3 楊瀟;草魚(yú)白細(xì)胞介素1β誘導(dǎo)表達(dá)的負(fù)調(diào)控機(jī)制及其在炎癥反應(yīng)中的意義[D];電子科技大學(xué);2014年

4 王超;豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）調(diào)控NLRP3介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的分子機(jī)制研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

5 趙力;MiR-214與腺苷A2A受體相互調(diào)控的分子機(jī)制及其在炎癥反應(yīng)中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 NURULIARIZKI SHINTA;[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

7 張宇絲;漢灘病毒感染引起血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥因子的產(chǎn)生及誘發(fā)炎癥反應(yīng)的機(jī)制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2016年

8 吳越;載脂蛋白E及其擬肽COG1410對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷和炎癥反應(yīng)的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

9 張兵;Mer受體酪氨酸激酶調(diào)控脂磷壁酸誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)及在金葡菌吞噬中的作用研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

10 李吉林;Toll-like receptor2/4在冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)調(diào)控中的作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

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1 要萌萌;Mdx小鼠骨骼肌中炎癥反應(yīng)和mpeg1的表達(dá)[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 曹春琪;麥冬不同部位對(duì)巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用及其物質(zhì)基礎(chǔ)研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

3 穆衛(wèi)濤;LPS誘導(dǎo)雞幾個(gè)炎癥反應(yīng)相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控研究[D];哈爾濱師范大學(xué);2016年

4 趙蘭婷;NOTCH信號(hào)通路對(duì)慢性阻塞性肺疾病炎癥反應(yīng)的影響及機(jī)制研究[D];蘭州大學(xué);2015年

5 陶麗妃;血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2激動(dòng)劑抑制視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的作用及機(jī)制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

6 何文;PAK4在乙型腦炎病毒感染介導(dǎo)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的作用研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

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8 張澤宇;脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)大鼠心肌缺血再灌注后炎癥反應(yīng)及心臟功能的影響[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2016年

9 王華偉;高場(chǎng)強(qiáng)磁共振在顱內(nèi)大型未破裂動(dòng)脈瘤中的應(yīng)用研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2016年

10 趙貴;MALAT1在LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中的功能與機(jī)制研究[D];東南大學(xué);2016年

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