目的建立大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞衰老模型,模擬老年大鼠體內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞衰老,探討衰老的星形膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)基對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖能力的影響。方法采用胰酶消化法分離新生1 d大鼠皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞和15 d胎鼠端腦神經(jīng)干細(xì)胞,200μmol/L H₂O₂誘導(dǎo)星型膠質(zhì)細(xì)胞4 h建立衰老模型;收取培養(yǎng)3 d和7 d衰老細(xì)胞上清作為條件培養(yǎng)基,以1∶3或1∶2的比例加入神經(jīng)干細(xì)胞增殖培養(yǎng)基中,通過神經(jīng)干細(xì)胞及神經(jīng)球計(jì)數(shù)觀察對(duì)增殖功能的影響,以正常星型膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)基作為對(duì)照。結(jié)果 3 d正常條件培養(yǎng)基對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞短期增殖無影響,對(duì)長期增殖有抑制作用; 3 d衰老條件培養(yǎng)基抑制神經(jīng)干細(xì)胞的增殖; 7 d正常條件培養(yǎng)基促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞短期增殖,對(duì)長期增殖有抑制作用; 7 d衰老條件培養(yǎng)基抑制神經(jīng)干細(xì)胞的增殖,抑制作用大于正常條件培養(yǎng)基。結(jié)論 H₂O₂誘導(dǎo)衰老的星形膠質(zhì)細(xì)胞抑制神經(jīng)干細(xì)胞的增殖,對(duì)長期增殖的抑制作用大于正常星形膠質(zhì)細(xì)胞。

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【部分圖文】：

圖1大鼠原代星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)干細(xì)胞(×200)

通過MTT法測(cè)定AS增殖活性，結(jié)果顯示不同濃度細(xì)胞接種后在第3～5天為對(duì)數(shù)生長期，增殖速度較快，之后慢慢降低，其中細(xì)胞濃度在2.5×104、5×104/mL時(shí)始終保持穩(wěn)定增長，見圖2。圖2大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞生長曲線

圖2大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞生長曲線

圖1大鼠原代星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)干細(xì)胞(×200)2.2H2O2誘導(dǎo)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞衰老

圖3H2O2誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞衰老

結(jié)果顯示，加入3d條件培養(yǎng)基，ACM2組、SACM1組和SACM2組均可使神經(jīng)球數(shù)量減少(P<0.05)，條件培養(yǎng)基的含量越高，神經(jīng)球數(shù)量越少，直徑越大，見圖4A、B。消化為單個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，ACM組神經(jīng)干細(xì)胞的數(shù)量變化沒有顯著性差異，而SACM1組神經(jīng)干細(xì)胞數(shù)量降低(18....

圖43d條件培養(yǎng)基對(duì)NSC短期增殖功能的影響

圖3H2O2誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞衰老加入7d條件培養(yǎng)基，ACM或者SACM均可使神經(jīng)球數(shù)量減少(P<0.05)，條件培養(yǎng)基的含量越高，神經(jīng)球數(shù)量越少，直徑越大，見圖5A、B。消化為單個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，ACM2組神經(jīng)干細(xì)胞數(shù)量增加(22.21±7.02)%,SACM2組降低(24....

本文編號(hào)：3923961