目的:樹突狀細(xì)胞是重要的抗原提呈細(xì)胞,通過處理和提呈抗原,從而啟動T細(xì)胞反應(yīng),在固有免疫和適應(yīng)性免疫中發(fā)揮關(guān)鍵作用。在樹突狀細(xì)胞發(fā)揮作用的過程中,其內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(Endoplasmic reticulum,ER)中需要大量新蛋白質(zhì)的合成。Sel1L分子參與組成的ER相關(guān)降解復(fù)合體(Endoplasmic reticulum associated degradation,ERAD)對胞內(nèi)非正常折疊蛋白的快速清除,是保證這些新合成蛋白質(zhì)正常折疊的重要機(jī)制,并可能參與對樹突狀細(xì)胞表型和功能的調(diào)控,以及影響樹突狀細(xì)胞自噬。因此,闡明Sel1L分子對樹突狀細(xì)胞表型、功能以及自噬的調(diào)控作用,對正確認(rèn)識樹突狀細(xì)胞以及免疫應(yīng)答有重要意義。方法:1.利用Cre-loxP重組酶系統(tǒng)建立DCs定向敲除Sel1L小鼠模型,將CD11c-Cre^+/-小鼠與Sel1L^f/f小鼠進(jìn)行繁育,至F3代時通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)篩選出用于實驗的CD11c-Cre^-/-Sel1L^f/f與CD11c-Cre^+/-S...

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮寫索引
第一章 緒論
    1.1 Sel1L分子
        1.1.1 Sel1L基本介紹
        1.1.2 Sel1L研究進(jìn)展
    1.2 樹突狀細(xì)胞
        1.2.1 樹突狀細(xì)胞的發(fā)育
        1.2.2 樹突狀細(xì)胞的分類
        1.2.3 樹突狀細(xì)胞的功能
        1.2.4 樹突狀細(xì)胞與相關(guān)疾病
    1.3 自噬
        1.3.1 自噬與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的關(guān)系
        1.3.2 自噬的主要途徑
        1.3.3 與自噬相關(guān)的mTOR信號通路
        1.3.4 mTOR信號通路與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的關(guān)系
    1.4 本實驗的研究目的、方法、實驗設(shè)計及意義
        1.4.1 研究目的
        1.4.2 研究方法
        1.4.3 技術(shù)路線
        1.4.4 研究意義
第二章 Sel1L分子調(diào)控樹突狀細(xì)胞的表型和功能
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要試劑的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 利用Cre-loxP系統(tǒng)建立DCs定向敲除Sel1L小鼠模型
        2.2.2 利用PCR進(jìn)行小鼠基因鑒定
        2.2.3 小鼠骨髓細(xì)胞的制備及BMDCs的體外培養(yǎng)
        2.2.4 BMDCs的 RNA測序
        2.2.5 流式細(xì)胞術(shù)分析BMDCs膜表面共刺激分子和MHC-I、MHC-II類分子的表達(dá)
        2.2.6 ELISA法檢測BMDCs上清中細(xì)胞因子的分泌
        2.2.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測抗原特異性CD4+T細(xì)胞體外增殖的能力
        2.2.8 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 建立DCs定向敲除Sel1L小鼠模型
        2.3.2 mRNA功能富集分析
        2.3.3 DCs定向敲除Sel1L對小鼠BMDCsCD80、CD86、MHC-I和 MHC-II類分子的影響
        2.3.4 DCs定向敲除Sel1L對小鼠BMDCs分泌細(xì)胞因子的影響
        2.3.5 DCs中 Sel1L缺失抑制BMDCs激活抗原特異性CD4+T細(xì)胞的增殖
    2.4 討論
第三章 Sel1L分子調(diào)控樹突狀細(xì)胞的自噬
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗動物
        3.1.2 主要儀器
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要試劑的配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 BMDCs的 RNA測序
        3.2.2 透射電子顯微鏡(TEM)檢測BMDCs中的自噬小體
        3.2.3 免疫熒光法檢測BMDCs中 LC3 的表達(dá)水平
        3.2.4 Western Blot技術(shù)檢測BMDCs中 BiP、LC3和p62 的表達(dá)水平
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 DCs中 Sel1L的缺失激活BMDCs內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
        3.3.2 DCs中定向敲除Sel1L后自噬小體增多
        3.3.3 DCs中 Sel1L的缺失促進(jìn)BMDCs表達(dá)LC3
        3.3.4 DCs中 Sel1L的缺失對LC3和p62 表達(dá)的影響
    3.4 討論
第四章 Sel1L分子影響樹突狀細(xì)胞m TOR信號通路
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗動物
        4.1.2 主要儀器
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 主要試劑的配制
    4.2 實驗方法
        4.2.1 Western Blot技術(shù)檢測BMDCs中 mTOR信號通路相關(guān)蛋白
    4.3 實驗結(jié)果
    4.4 討論
第五章 主要結(jié)論及展望
    5.1 主要結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間發(fā)表的文章及參加的會議



本文編號：3924174