寨卡病毒(Zika virus, ZIKV)是引起成人格林巴利綜合征(Guillain-Barre syndrome, GBS)以及胎兒和新生兒小頭畸形疾病的重要病原體。有效的抗病毒藥物篩選系統(tǒng)是防治ZIKV感染的有效工具。本研究構(gòu)建了以海腎熒光素酶為檢測靶標(biāo)的寨卡病毒復(fù)制子Rluc-ZIKV-Rep,并通過突變NS5蛋白,構(gòu)建了非復(fù)制型寨卡病毒復(fù)制子Rluc-ZIKV-Rep NS5△GDD。為了檢測復(fù)制子的功能,將兩種復(fù)制子轉(zhuǎn)化至Vero細(xì)胞,結(jié)果顯示隨著時(shí)間延長, Rluc-ZIKV-Rep熒光素酶活性逐漸增加,寨卡病毒m RNA拷貝數(shù)逐漸增多,證明以海腎熒光素酶為檢測靶標(biāo)的寨卡病毒復(fù)制子構(gòu)建成功。為了檢測該系統(tǒng)是否能夠用于抗病毒藥物篩選,用馬尼地平和西尼地平兩種抗寨卡病毒的藥物進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示Rluc-ZIKV-Rep的復(fù)制能力隨著藥物濃度的增加而逐漸降低,呈現(xiàn)一種劑量依賴的方式,說明該系統(tǒng)可以用于抗病毒藥物的篩選。綜上所述,本研究構(gòu)建了一種可以用于抗病毒藥物篩選的寨卡病毒復(fù)制子,為篩選有效的抗病毒藥物提供了有力工具。

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【文章目錄】：
1 Materials and methods
    1.1 Cells and antiviral drugs
    1.2 Plasmid construction
    1.3 Luciferase assay
    1.4 Reverse transcription quantitative PCR(RT-qPCR)
    1.5 Rluc-ZIKV-Rep inhibition assay
    1.6 Statistical analysis
2 Results
    2.1 Construction of the Rluc-ZIKV-Rep
    2.2 Rluc-ZIKV-Rep can transfect and repli-cate in Vero cells
    2.3 Validation of Rluc-ZIKV-Rep based as-says for screening antivirals
3 Discussion



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