研究背景:肉毒毒素是肉毒桿菌生長(zhǎng)繁殖過(guò)程中分泌的一種毒性蛋白,具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性。根據(jù)其抗原性的差異,BoNTs可分成BoNT/A-G 7個(gè)類型,其中BoNT/A是毒性最強(qiáng)的物質(zhì)。疫苗接種是預(yù)防肉毒中毒的最有效策略,其中最具研究前景的是新型重組亞單位疫苗。目的:探究A型肉毒毒素各結(jié)構(gòu)域抗原片段中能引起顯著免疫保護(hù)的最佳靶抗原片段。方法:通過(guò)基因工程技術(shù)制備了BoNT/A各功能結(jié)構(gòu)域抗原片段并連接到pTIG-Trx原核表達(dá)載體上,將構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌系統(tǒng)中誘導(dǎo)表達(dá),并通過(guò)Ni-NTA親和層析法純化得到了高純度的重組抗原(如Hc、HN-L等),并檢測(cè)各重組抗原的免疫保護(hù)作用與免疫保護(hù)機(jī)制。結(jié)果:本研究完成了BoNT/A各功能結(jié)構(gòu)域表位抗原的制備與鑒定,并對(duì)各重組抗原的免疫保護(hù)效力及免疫保護(hù)作用機(jī)制進(jìn)行了研究,結(jié)果表明BoNT/A各功能結(jié)構(gòu)域表位抗原中,Hc和HN-L抗原片段具有最好的免疫原性和免疫保護(hù)性,重要的中和抗體表位主要集中在毒素分子的Hc和HN-L抗原上,其中Hc有兩個(gè),HN-L有一個(gè)。結(jié)論:Hc受體結(jié)合區(qū)分子具有合適的大小與制備的便利性,能夠產(chǎn)生完全的免疫保護(hù)作用,具備比H...

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