發(fā)布時(shí)間：2023-11-08 18:24

　　目的克隆、表達(dá)伯氏瘧原蟲靜息巰基氧化酶(PbQSOX)基因,純化重組Pb QSOX蛋白(rPbQSOX),并對其生物信息學(xué)特點(diǎn)和酶活性進(jìn)行分析。方法分別采用BLAST、 SMART、 ClustalW對P QSOX蛋白的信號(hào)肽、蛋白結(jié)構(gòu)域、活性位點(diǎn)、同源性進(jìn)行分析;通過BLAST和MAGA5構(gòu)建PbQSOX的系統(tǒng)進(jìn)化樹;應(yīng)用SWISS-MODEL對PbQSOX蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測。BALB/c雌性小鼠經(jīng)腹腔感染伯氏瘧原蟲(1×107/鼠),于感染后第4天提取瘧原蟲基因組DNA。PCR擴(kuò)增PbQSOX基因,經(jīng)測序正確后,將目的片段連接至原核表達(dá)載體pET30a(+),構(gòu)建重組質(zhì)粒pET30a(+)-PbQSOX。將鑒定正確的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌BL21中,經(jīng)異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)后,取菌液進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blotting)分析;應(yīng)用鎳氨三乙酸瓊脂糖柱純化可溶性的rPbQSOX,并以三(2-羧乙基)膦(TCEP)或二硫蘇糖醇(DTT)為酶反應(yīng)底物分析rPbQSOX的酶活性。P QSOX大...

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 質(zhì)粒、菌株、瘧原蟲蟲株及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來源
    1.2 主要試劑
    1.3 Pb QSOX蛋白的生物信息學(xué)分析
    1.4 瘧原蟲基因組DNA的提取
    1.5 Pb QSOX基因的擴(kuò)增
    1.6 pET30a(+)-Pb QSOX重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.7 r Pb QSOX蛋白的表達(dá)與純化
    1.8 r Pb QSOX的蛋白質(zhì)免疫印跡（Western blotting）分析
    1.9 r Pb QSOX酶活性分析
    1.1 0 倫理批準(zhǔn)和患者知情同意
    1.1 1 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 Pb QSOX的生物信息學(xué)分析
    2.2 pET30a(+)-Pb QSOX的構(gòu)建、原核表達(dá)和鑒定
    2.3 r Pb QSOX酶活性測定
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本文編號(hào)：3861501