發(fā)布時(shí)間：2023-10-30 17:58

　　目的:探討組蛋白去乙�；�3 (HDAC3)缺失對(duì)恒定型自然殺傷性T細(xì)胞(iNKT)數(shù)量、發(fā)育表型和細(xì)胞因子產(chǎn)生功能的影響,確定HDAC3在iNKT細(xì)胞發(fā)育和功能發(fā)揮中的調(diào)控作用。方法:采用T細(xì)胞特異的hdac3基因敲除(HDAC3KO)及其野生型正常對(duì)照(WT)小鼠,每種小鼠各取3～5只,分離小鼠胸腺、脾臟、淋巴結(jié)和肝臟淋巴細(xì)胞,采用細(xì)胞表面抗體染色和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HDAC3對(duì)iNKT細(xì)胞數(shù)量和發(fā)育表型的變化,實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次。采用HDAC3KO小鼠及其同系B6.SJL小鼠,每種小鼠各取4～6只;提取以上2種小鼠骨髓細(xì)胞,混合后經(jīng)尾靜脈注入經(jīng)γ射線照射的B6.SJL小鼠,以制備骨髓混合嵌合體模型,8周后流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同骨髓來(lái)源iNKT細(xì)胞在胸腺的產(chǎn)生和發(fā)育,實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。選取HDAC3KO和WT小鼠,每種各取小鼠3～5只;采用iNKT細(xì)胞特異激活劑半乳糖神經(jīng)酰胺腹腔注射4h后,收集各組小鼠脾臟淋巴細(xì)胞和血清,分別采用細(xì)胞內(nèi)染色、流式細(xì)胞術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)HDAC3作用下iNKT細(xì)胞因子水平,實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次。結(jié)果:與WT小鼠比較,HDAC3KO小鼠胸腺和外周免...

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、主要試劑和儀器
    1.2 小鼠基因型鑒定
    1.3 流式細(xì)胞術(shù)分析HDAC3KO小鼠iNKT細(xì)胞數(shù)量和發(fā)育表型
    1.4 骨髓混合嵌合體小鼠制備
    1.5 iNKT細(xì)胞活化和細(xì)胞內(nèi)染色分析
    1.6 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA）檢測(cè)HDAC3KO小鼠血清細(xì)胞因子水平
    1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 HDAC3敲除小鼠基因型鑒定
    2.2 HDAC3敲除小鼠胸腺、脾臟、肝臟和淋巴結(jié)中iNKT細(xì)胞數(shù)量
    2.3 HDAC3敲除小鼠胸腺中iNKT細(xì)胞發(fā)育的變化
    2.4 HDAC3通過(guò)內(nèi)源性途徑對(duì)iNKT細(xì)胞發(fā)育和成熟的調(diào)控作用
    2.5 HDAC3敲除小鼠iNKT細(xì)胞和血清中IFN-γ和IL-4水平
3 討論



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