目的初步探討恥垢分枝桿菌(Mycobacterium smegmatis)毒素-抗毒素(toxin-antitoxin,TA)系統(tǒng)基因的功能及其在細(xì)菌藥物耐受中的作用。方法利用無水四環(huán)素(ATc)誘導(dǎo)穿梭質(zhì)粒構(gòu)建毒素基因(MSMEG₃436和MSMEG₆760)表達(dá)系統(tǒng),檢測毒素基因表達(dá)的抑菌作用。應(yīng)用CRISPR-Cas12a基因編輯技術(shù)構(gòu)建△MSMEG₃435-3436和△MSMEG₆762-6760敲除菌株,探究毒素-抗毒素系統(tǒng)對菌株生長的影響。通過計(jì)算菌株存活率檢測MSMEG₃435-3436基因?qū)Ξ悷熾?96μg/ml)和利福平(40μg/ml)的耐受相關(guān)性。在恥垢分枝桿菌中用LacZ報(bào)告基因分別替換毒素-抗毒素基因(MSMEG₁277-1278、MSMEG₁283-1284、MSMEG₃435-3436、MSMEG₄447-4448和MSMEG₅635-56...

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【文章目錄】：
材料和方法
    一、材料來源
    二、主要試劑和儀器
    三、研究方法
    四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié)果
    一、恥垢分枝桿菌中毒素-抗毒素系統(tǒng)的鑒定及功能檢測
    二、敲除菌株生存能力鑒定及抗生素脅迫
    三、LacZ融合轉(zhuǎn)錄調(diào)控及啟動子活性檢測
討論



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