發(fā)布時間：2017-05-20 05:03

  本文關(guān)鍵詞：Eos蛋白在紅系和巨核系分化中的功能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景造血分化是生物體內(nèi)重要的生理過程,不僅涉及造血干細(xì)胞(Hematopoietic stem cells, HSC)的自我更新、各鏈系祖細(xì)胞的定向分化,還包括祖細(xì)胞向成熟血細(xì)胞分化和發(fā)育的全過程。紅系分化和巨核系分化是造血分化的重要分支,也是貫穿人一生的重要生理過程。轉(zhuǎn)錄因子Eos也叫IKZF4 (ikaros family zinc finger 4),是鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄因子ikaros家族中的一員。作為負(fù)性調(diào)節(jié)因子可以參與許多基因的表達(dá)調(diào)控。有研究表明,Eos也參與了造血過程中紅系的分化,但作用機(jī)制還不清楚。而關(guān)于Eos在巨核系分化中的作用及其機(jī)制知之更少。目的分析轉(zhuǎn)錄因子Eos在紅系和巨核系分化中的作用,并初步探討其調(diào)控機(jī)制。方法1.細(xì)胞培養(yǎng)：將生長狀態(tài)良好的K562細(xì)胞分為紅系誘導(dǎo)組和巨核系誘導(dǎo)組進(jìn)行傳代培養(yǎng)。前者傳至4個中號培養(yǎng)皿中,分別標(biāo)記為Oh、12h、24h、8h4個時間段,加入50μM氯化高鐵血紅素(Hemin)。后者傳至6個中號培養(yǎng)皿中,分別標(biāo)記為0h、12h、24h、48h、 72h、96h,6個時間段,加入50pM佛波酯(PMA)。在37℃、5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),誘導(dǎo)K562細(xì)胞分別向紅系和巨核系分化。2.聯(lián)苯胺染色與瑞氏-姬姆薩染色：收集各組細(xì)胞,1000 rpm離心5min,收集沉淀,用胎牛血清重懸,涂片染色,鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)變化。3.流式細(xì)胞檢測：收集各培養(yǎng)組細(xì)胞,檢測誘導(dǎo)前后細(xì)胞分化相關(guān)表面標(biāo)志物CD41a、CD61、CD235a、CD71的表達(dá)情況。4. Real-time PCR檢測：收集細(xì)胞,提取RNA,檢測誘導(dǎo)后Eos mRNA的表達(dá)量。5. Western blot蛋白檢測：收集各培養(yǎng)組細(xì)胞,裂解后提取蛋白,Western blot檢測誘導(dǎo)前后轉(zhuǎn)錄因子Eos和紅系特異轉(zhuǎn)錄因子GATA-1蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果1.K562細(xì)胞經(jīng)PMA誘導(dǎo)后瑞氏-姬姆薩染色,隨著誘導(dǎo)時間的延長細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化,細(xì)胞體積變大,核越來越大,大核細(xì)胞增多,這些結(jié)果進(jìn)一步顯示PMA誘導(dǎo)K562細(xì)胞巨核系分化成功。2.K562細(xì)胞經(jīng)Hemin誘導(dǎo)后,隨紅系分化過程Eos蛋白和mRNA表達(dá)水平逐漸下降。3.K562細(xì)胞中過表達(dá)Eos,然后經(jīng)Hemin誘導(dǎo)48h后,流式結(jié)果顯示紅系細(xì)胞表面標(biāo)志CD71、CD235a的表達(dá)量明顯低于對照組,說明Eos對K562細(xì)胞紅系分化有抑制作用。4.過表達(dá)Eos的K562細(xì)胞經(jīng)Hemin誘導(dǎo)48h后,聯(lián)苯胺染色顯示細(xì)胞紅系分化的陽性率明顯低于對照組,進(jìn)一步說明Eos蛋白對紅系分化有抑制作用。5.K562細(xì)胞經(jīng)PMA誘導(dǎo)后Eos蛋白表達(dá)水平逐漸下降,GATA-1蛋白水平逐漸升高。6.K562細(xì)胞經(jīng)PMA誘導(dǎo)后,巨核系細(xì)胞表面標(biāo)志CD41a、CD61表達(dá)量隨誘導(dǎo)時間延長而升高,說明PMA對K562細(xì)胞的巨核系分化誘導(dǎo)成功。結(jié)論Eos蛋白在Hemin誘導(dǎo)的K562細(xì)胞向紅系分化過程中起抑制作用,Eos蛋白在巨核系分化過程中顯著降低,過表達(dá)Eos蛋白在巨核系分化過程中的作用我們試驗(yàn)正在進(jìn)行中。
【關(guān)鍵詞】：轉(zhuǎn)錄因子Eos GATA-1 分化 巨核系 紅系
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 實(shí)驗(yàn)材料與主要試劑12-18
• 實(shí)驗(yàn)方法18-31
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-40
• 討論40-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 綜述：調(diào)控因子在巨核細(xì)胞分化中的作用48-67
• 參考文獻(xiàn)58-67
• 附錄67-68
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況68-69
• 致謝69-70
• 個人簡歷70

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 馬艷妮;鞏蓓;董賀;王斌;閻峗夢;張俊武;余佳;;轉(zhuǎn)錄因子Sp1抑制K562細(xì)胞紅系分化[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2013年05期

2 李歡;饒青;;骨髓微環(huán)境對造血干細(xì)胞靜息的調(diào)節(jié)機(jī)制[J];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2015年01期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張昀源;miR9對造血干/祖細(xì)胞的影響及其在Evil誘導(dǎo)白血病中的作用及機(jī)制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

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本文編號：380686