目的表達結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,M. tb)潛伏期特異抗原Rv3044,并檢測其能否被結核(tuberculosis,TB)感染者外周血T細胞識別,及其在小鼠模型中的免疫原性。方法以分子克隆技術構建質粒pET28aRv3044,IPTG誘導表達、親和層析純化r Rv3044蛋白,Western blot法進行鑒定;全血IFNγ分析試驗(whole blood IFNγanalysis test,WBIA)檢測其是否被TB感染者識別;聯(lián)合融合佐劑DMT免疫C57BL/6小鼠,檢測特異性CD4+Th1型應答和體液免疫應答水平。結果構建的重組表達質粒p ET28a-Rv3044經(jīng)雙酶切及測序鑒定證明構建正確,表達及純化的rRv3044蛋白相對分子質量均為38 600。r Rv3044刺激的TB感染者,尤其TB潛伏感染(latent TB infection,LTBI)者,外周血T細胞分泌的IFNγ水平均顯著高于健康對照者(P <0. 05);BCG+rRv044/DMT組誘導小鼠產(chǎn)生顯著高水平的IgG抗體及其亞類,趨向于Th1型免疫應答,同時...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 毒株、菌株及載體
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 實驗動物
    1.4 實驗動物分組及免疫
    1.5 重組質粒的構建
    1.6 重組蛋白的表達及純化
    1.7 純化產(chǎn)物的鑒定
    1.8 受試者分組及人群外周血抗原特異性IFNγ濃度的WBIA檢測
    1.9 小鼠血清抗原特異性抗體水平的檢測
    1.1 0 脾細胞培養(yǎng)上清中抗原特異性Th1型細胞因子水平的檢測
    1.1 1 統(tǒng)計學分析
2 結果
    2.1 重組表達質粒pET28a-Rv3044的鑒定
    2.2 rRv3044蛋白的鑒定
    2.3 人群外周血中抗原特異性IFNγ水平
    2.4小鼠血清中抗原特異性IgG抗體水平
    2.5 小鼠脾細胞特異性Th1型細胞因子水平
3 討論



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