發(fā)布時(shí)間：2023-04-28 01:45

　　目的:神經(jīng)突起的生長和延伸受到細(xì)胞內(nèi)化學(xué)和力學(xué)信號(hào)的共同調(diào)節(jié)。Talin蛋白由于它的特殊結(jié)構(gòu)域能調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)化學(xué)信號(hào)和力學(xué)活動(dòng),在神經(jīng)元極化和生長過程中起關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用。Talin由頭部(head)和桿部(rod)兩個(gè)功能結(jié)構(gòu)域組成,但是各功能域是如何通過調(diào)節(jié)化學(xué)信號(hào)及力學(xué)活動(dòng)來影響神經(jīng)突起生長的機(jī)理還未明確。同時(shí),傳統(tǒng)中醫(yī)藥也能有效的促進(jìn)神經(jīng)的修復(fù)和再生,它們是否通過Talin的化學(xué)信號(hào)和力學(xué)活動(dòng)參與神經(jīng)生長也有待探索。本研究采用基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移原理(fluorescence resonance energy transfer,FRET)的張力探針技術(shù),揭示了 Talin化學(xué)信號(hào)和力學(xué)活動(dòng)在神經(jīng)極化和生長中的調(diào)控機(jī)制及其相關(guān)中藥的藥理學(xué)機(jī)制。方法:采用NGF和膠質(zhì)瘢痕抑制劑aggrecan刺激PC12和SH-SY5Y細(xì)胞分別構(gòu)建神經(jīng)突起生長和抑制模型;脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染克隆質(zhì)粒在細(xì)胞內(nèi)實(shí)現(xiàn)Talin,Talin head,Talin rod各亞分子結(jié)構(gòu)域的表達(dá);免疫印跡鑒定Talin,Integrin,FAK及p-FAK的蛋白水平。免疫熒光觀察Integrin活性變化、Talin和DOK1的...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
前言
材料和方法
    1. 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        1.1 細(xì)胞系
        1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.3 儀器設(shè)備
        1.4 干擾RNA與質(zhì)粒
        1.5 實(shí)驗(yàn)抗體試劑
    2. 研究方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 總RNA的提取及鑒定
        2.3 Real-time RT-PCR
        2.4 蛋白質(zhì)的抽提及濃度測(cè)定
        2.5 免疫印跡
        2.6 免疫熒光
        2.7 活細(xì)胞染色
        2.8 原代大腦皮層神經(jīng)元的提取
        2.9 滲透壓的測(cè)定
        2.10 質(zhì)粒的設(shè)計(jì)和轉(zhuǎn)染
        2.11 小干擾的轉(zhuǎn)染
        2.12 張力探針結(jié)構(gòu)及其有效性與可行性的驗(yàn)證
    3. 數(shù)據(jù)處理
結(jié)果
    第一部分. Talin通過整合素化學(xué)信號(hào)及其相關(guān)張力活動(dòng)共同調(diào)控神經(jīng)突起的生長
        1. Talin的完整結(jié)構(gòu)是促進(jìn)神經(jīng)突起延伸所必需的
        2. 在神經(jīng)生長過程中NGF和Aggrecan調(diào)控Talin rod內(nèi)的張力
        3. SH-SY5Y細(xì)胞中增加的Talin張力來源于向內(nèi)的微絲力
        4. Talin張力受整合素構(gòu)象變化調(diào)控
        5. Talin和Integrin信號(hào)能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)滲透壓
    第二部分. DOKI下調(diào)整合素信號(hào)和Talin張力抑制神經(jīng)突起的生長
        1. Aggrecan能上調(diào)在NGF刺激下的PC12和SH-SY5Y細(xì)胞中DOK1和SHARPIN的蛋白表達(dá)量
        2. DOK1能通過下調(diào)整合素的活性抑制神經(jīng)突起的延伸
        3. DOK1能通過削弱Talin的張力和細(xì)胞內(nèi)滲透壓抑制神經(jīng)突起的延伸
        4. DOK1能抑制大腦皮層神經(jīng)元軸突的生長
    第三部分. 人參皂苷RD通過增強(qiáng)Talin張力促進(jìn)神經(jīng)突起的延伸
        1. 人參皂苷RD能促進(jìn)神經(jīng)突起的生長與延伸
        2. 人參皂苷RD能上調(diào)Talin的張力
討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄(一) 綜述
        參考文獻(xiàn)
    附錄(二) 縮略詞表
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3803487