目的利用CRISPR/Cas9技術(shù)敲除FVB小鼠Mex3c基因,為進(jìn)行相關(guān)研究提供Mex3c基因缺陷小鼠模型。方法利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù),針對(duì)性設(shè)計(jì)Mex3c基因1～2外顯子sgRNA,將小鼠mex3c基因的sgRNA和Cas9 mRNA共注射到受精卵中,產(chǎn)生目標(biāo)基因敲除子代,待小鼠出生3周后剪鼠尾提取DNA并進(jìn)行PCR鑒定,所獲F0代雜合小鼠繼續(xù)與野生型小鼠合籠繁殖獲取F1、F2代小鼠,剪取組織提取DNA鑒定分離雜合體小鼠。結(jié)果獲得了6只Mex3c基因雜合突變的F0代小鼠,F1代共20只雌性雜合小鼠,F2代24只雌性雜合小鼠,能夠穩(wěn)定遺傳Mex3c缺陷基因�；蚪M測序結(jié)果顯示獲得正確敲除的雜合子。結(jié)論成功獲得Mex3c基因缺陷的FVB小鼠,為研究不同能量代謝條件下的子代鼠胚神經(jīng)管發(fā)生發(fā)育提供了重要工具。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 Mex3c基因序列分析和基因敲除靶點(diǎn)設(shè)計(jì)合成
    1.3 gRNA的脫靶效應(yīng)分析及CRISPR/CaS 9誘導(dǎo)突變的gRNA檢測
    1.4 小鼠受精卵體外顯微注射
    1.5 小鼠基因型鑒定
2 結(jié) 果
    2.1 小鼠Mex3c基因gRNA設(shè)計(jì)及其表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.2 gRNA脫靶效應(yīng)分析結(jié)果
    2.3 Mex3c+/-小鼠基因型的鑒定
3 討 論



本文編號(hào)：3757946