目的:探究SarA-AG、IcaA-AG及IcaA-SarA-AG(Azami Green用AG表示)融合基因的DNA疫苗及對小鼠免疫應答的影響。方法:以金黃色葡萄球菌基因組為模板,通過PCR等反應進行SarA-AG、Ica A-AG及IcaA-SarA-AG融合基因DNA疫苗的構建,將DNA疫苗轉(zhuǎn)染至HeLa細胞,熒光顯微鏡下觀察DNA疫苗的瞬時表達情況,將轉(zhuǎn)染成功2周后的細胞進行基因組提取,PCR檢測質(zhì)粒在染色體上的整合情況。使用AG、SarA-AG(A組)、Ica A-AG(B組)及Ica A-SarA-AG(C組) 4組免疫BALB/c小鼠,應用ELISA試劑盒檢測小鼠血清中IgG抗體、IL-2、IL-4、IL-13、IFN-γ及TNF-α的分泌情況。結(jié)果:成功構建SarA-AG、IcaA-AG及Ica A-SarA-AG融合基因DNA疫苗,熒光顯微鏡下觀察DNA疫苗轉(zhuǎn)染情況,結(jié)果顯示有綠色熒光。提取細胞基因組PCR檢測結(jié)果顯示未出現(xiàn)目的基因條帶。免疫小鼠后,A、B、C組均能夠誘導小鼠產(chǎn)生較高水平的IgG抗體。與空白組及空載體AG組相比,A、B組均能分泌較高水平的IL-2(P ...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實驗材料
        1.1.1 載體、細胞株及實驗動物
        1.1.2 主要試劑
    1.2 實驗方法
        1.2.1 引物設計
        1.2.2 PCR擴增并回收目的片段與T載體連接
        1.2.4 T載體重組質(zhì)粒連接、菌液PCR雙酶切鑒定
        1.2.5 SarA-AG、IcaA-AG、IcaA-SarA-AG DNA疫苗的構建及細胞轉(zhuǎn)染
2 結(jié)果與分析
    2.1 目的基因片段的獲取
    2.2 目的基因的T載體克隆、鑒定及測序
    2.3 Sar A-AG、Ica A-AG、Ica A-Sar A-AG DNA疫苗的構建
    2.4 細胞轉(zhuǎn)染結(jié)果
    2.5 PCR檢測DNA疫苗安全性
    2.6 DNA疫苗免疫小鼠血清IgG抗體水平檢測
    2.7 DNA疫苗免疫小鼠細胞因子的分泌情況
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