發(fā)布時(shí)間：2023-03-05 20:48

　　目的:探究SarA-AG、IcaA-AG及IcaA-SarA-AG(Azami Green用AG表示)融合基因的DNA疫苗及對小鼠免疫應(yīng)答的影響。方法:以金黃色葡萄球菌基因組為模板,通過PCR等反應(yīng)進(jìn)行SarA-AG、Ica A-AG及IcaA-SarA-AG融合基因DNA疫苗的構(gòu)建,將DNA疫苗轉(zhuǎn)染至HeLa細(xì)胞,熒光顯微鏡下觀察DNA疫苗的瞬時(shí)表達(dá)情況,將轉(zhuǎn)染成功2周后的細(xì)胞進(jìn)行基因組提取,PCR檢測質(zhì)粒在染色體上的整合情況。使用AG、SarA-AG(A組)、Ica A-AG(B組)及Ica A-SarA-AG(C組) 4組免疫BALB/c小鼠,應(yīng)用ELISA試劑盒檢測小鼠血清中IgG抗體、IL-2、IL-4、IL-13、IFN-γ及TNF-α的分泌情況。結(jié)果:成功構(gòu)建SarA-AG、IcaA-AG及Ica A-SarA-AG融合基因DNA疫苗,熒光顯微鏡下觀察DNA疫苗轉(zhuǎn)染情況,結(jié)果顯示有綠色熒光。提取細(xì)胞基因組PCR檢測結(jié)果顯示未出現(xiàn)目的基因條帶。免疫小鼠后,A、B、C組均能夠誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生較高水平的IgG抗體。與空白組及空載體AG組相比,A、B組均能分泌較高水平的IL-2(P ...

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 載體、細(xì)胞株及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.1.2 主要試劑
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 引物設(shè)計(jì)
        1.2.2 PCR擴(kuò)增并回收目的片段與T載體連接
        1.2.4 T載體重組質(zhì)粒連接、菌液PCR雙酶切鑒定
        1.2.5 SarA-AG、IcaA-AG、IcaA-SarA-AG DNA疫苗的構(gòu)建及細(xì)胞轉(zhuǎn)染
2 結(jié)果與分析
    2.1 目的基因片段的獲取
    2.2 目的基因的T載體克隆、鑒定及測序
    2.3 Sar A-AG、Ica A-AG、Ica A-Sar A-AG DNA疫苗的構(gòu)建
    2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染結(jié)果
    2.5 PCR檢測DNA疫苗安全性
    2.6 DNA疫苗免疫小鼠血清IgG抗體水平檢測
    2.7 DNA疫苗免疫小鼠細(xì)胞因子的分泌情況
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