背景:角膜上皮干細(xì)胞定位于角膜緣,又稱之為角膜緣干細(xì)胞,臨床上由于眼表嚴(yán)重?zé)釤齻⒒瘜W(xué)性燒傷、慢性炎癥等原因引起的角膜緣干細(xì)胞缺乏或功能障礙治療較為棘手。目前利用組織工程技術(shù)體外培養(yǎng)角膜上皮干細(xì)胞并進行臨床移植成為新型有效的治療方向。目的:探討在無血清培養(yǎng)條件下采用改良組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人角膜上皮干細(xì)胞的可行性。方法:人角膜緣組織來自河南省眼庫,植片直徑小于8mm角膜移植術(shù)后的供者剩余眼球材料,手術(shù)顯微鏡下剖取角膜緣上皮層外2/3區(qū)域,采用2種方法培養(yǎng)人角膜上皮干細(xì)胞,常規(guī)組織塊培養(yǎng)組是將組織塊上皮面向上貼壁,加入K-SFM培養(yǎng)液后置于37℃、體積分?jǐn)?shù)為5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);改良組織塊培養(yǎng)組是先將組織塊浸泡于K-SFM培養(yǎng)液中,置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育12h,然后組織塊上皮面向下貼壁培養(yǎng)。組織塊周邊有細(xì)胞游離出貼壁生長記作"培養(yǎng)第1天",每日相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長變化。利用免疫熒光染色技術(shù)檢測改良組織塊培養(yǎng)第5,10,14天時原代細(xì)胞中p63及K3的表達(dá)。結(jié)果與結(jié)論:①改良組織塊培養(yǎng)組出膜時間明顯短于常規(guī)組織塊培養(yǎng)組(P <0.05),出膜率明顯高于常規(guī)組...

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【文章目錄】：
0引言Introduction
1 材料和方法Materials and methods
    1.1 設(shè)計
    1.2 時間及地點
    1.3 材料
        1.3.1 人角膜緣組織
        1.3.2 實驗儀器及試劑
    1.4 實驗方法
        1.4.1 取材
        1.4.2 兩種組織塊培養(yǎng)法的對比觀察
        1.4.3 改良組織塊培養(yǎng)組原代細(xì)胞的培養(yǎng)
        1.4.4 改良組織塊培養(yǎng)組培養(yǎng)不同時間點K3、p63的表達(dá)
    1.5 主要觀察指標(biāo)
    1.6 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果Results
    2.1 常規(guī)組織塊培養(yǎng)組和改良組織塊培養(yǎng)組的出膜時間和出膜率以及細(xì)胞生長狀態(tài)
    2.2改良組織塊培養(yǎng)組原代細(xì)胞在不同時間點的形態(tài)
    2.3 改良組織塊培養(yǎng)組原代細(xì)胞培養(yǎng)不同時間點K3、p63的表達(dá)
3 討論Discussion



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