本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌MPT64和PE35及PPE68基因多態(tài)性對(duì)其蛋白功能影響的初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：近年來(lái),結(jié)核分枝桿菌T細(xì)胞抗原表位多態(tài)性分析發(fā)現(xiàn),結(jié)核分枝桿菌的某些T細(xì)胞抗原表位是可變的,并提示有可能與結(jié)核分枝桿菌的免疫逃逸有關(guān)。MPT64, ESAT-6和CFP-10是結(jié)核分枝桿菌的三種重要分泌蛋白,在結(jié)核病的診斷及疫苗候選抗原方面有重要作用。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)結(jié)核分枝桿菌MPT64基因具有高度多態(tài)性,而ESAT-6/CFP-10基因是保守的,但影響ESAT-6/CFP-10蛋白的PE35和PPE68兩個(gè)基因的人類T細(xì)胞表位是高度可變的,提示這兩種抗原很可能參與了結(jié)核分枝桿菌的免疫逃逸。然而,關(guān)于PE35和PPE68基因的多態(tài)性及對(duì)分泌蛋白ESAT-6/CFP-10的影響的研究較少。MPT64,是短期培養(yǎng)濾液中的主要成分,MPT64蛋白由人類Thl細(xì)胞識(shí)別,這對(duì)于結(jié)核病的診斷或是作為結(jié)核疫苗候選新抗原方面很有幫助。以往研究報(bào)道MPT64在不同的國(guó)家和地區(qū)均存在一定的基因多態(tài)性并會(huì)影響MPT64抗原的檢測(cè)。為了進(jìn)一步研究MPT64、PE35和PPE68基因多態(tài)性及其對(duì)結(jié)核分枝桿菌毒力和致病性的影響,以及由此可能引起的免疫逃逸的機(jī)制。我們選取了影響ESX-1分泌系統(tǒng)的基因PE35和PPE68及MPT64,同時(shí)選取影響ESX-1分泌系統(tǒng)的6個(gè)基因(Rv3870、Rv3877、Rv3616c、Rv3871、Rv3615c和Rv3849),研究基因多態(tài)性對(duì)分泌蛋白MPT64, ESAT-6/CFP-10及蛋白功能的影響。從菌株庫(kù)選取161株菌,培養(yǎng)并提取DNA, PCR擴(kuò)增,序列比對(duì)分析,分析目的基因的多態(tài)性；再選取有較大突變及可能對(duì)蛋白結(jié)構(gòu)有影響的基因,通過(guò)比較突變株與野生株的蛋白表達(dá)水平或?qū)z測(cè)試劑盒的影響,來(lái)初步研究這些基因?qū)Ψ置诘鞍坠δ艿挠绊憽＝Y(jié)果顯示在所選的基因中,影響ESX-1分泌系統(tǒng)的6個(gè)基因中,僅Rv3871基因有明顯的突變,其余基因(Rv3870、Rv3877、Rv3616c、Rv3615c和Rv3849)經(jīng)測(cè)序及比對(duì)分析,均無(wú)明顯的基因多態(tài)性。Rv3871基因,6株有非同義突變,6株有同義突變,1株有3bp的缺失。而MPT64及PE35和PPE68基因存在較大改變,并可能引起相應(yīng)蛋白結(jié)構(gòu)的改變。在161株中13株表現(xiàn)有MPT64基因的多態(tài)性,8株菌有196-258位置63bp的缺失,4株菌有單位點(diǎn)的突變,一株有單位點(diǎn)的插入。對(duì)于PE35基因,23株顯示有PE35基因多態(tài)性,這包括21株菌有A堿基缺失,另外2株有非同義突變；而PPE68基因,8株菌有PPE68基因多態(tài)性,包括2株有兩種不同的缺失,6株顯示有5種非同義突變。通過(guò)試劑盒檢測(cè)發(fā)現(xiàn),MPT64基因63bp缺失的突變株出現(xiàn)假陰性結(jié)果,而單位點(diǎn)的突變并未引起假陰性的結(jié)果；野生株均是陽(yáng)性結(jié)果。雖然PE35和PPE68存在基因多態(tài)性及T細(xì)胞表位多態(tài)性,但PE35和PPE68基因多態(tài)性對(duì)ESAT-6/CFP-10蛋白無(wú)明顯影響。結(jié)核分枝桿菌MPT64基因的多態(tài)性會(huì)對(duì)以檢測(cè)MPT64的試劑盒產(chǎn)生影響,在我們的研究中,63bp缺失的突變會(huì)引起假陰性的結(jié)果。影響ESX-1分泌系統(tǒng)的PE35和PPE68基因存在多態(tài)性,然而對(duì)結(jié)核分枝桿菌主要毒力因子ESAT-6,CFP-10沒(méi)有明顯的影響。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)核分枝桿菌 PE35 PPE68 MPT64 基因多態(tài)性
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R378.911
【目錄】：

• ABBREVIATION6-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-16
• 材料和方法16-30
• 結(jié)果30-47
• 討論47-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-61
• 綜述61-78
• 參考文獻(xiàn)68-78
• 致謝78-79
• 發(fā)表論文79

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本文編號(hào)：374269