目的:結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）是導(dǎo)致結(jié)核�。═uberculosis,TB）的病原菌,其感染后主要寄生于巨噬細(xì)胞中。巨噬細(xì)胞是先天性免疫系統(tǒng)中的一員,細(xì)胞膜表面、胞內(nèi)器室膜上存在模式識別受體（pattern recognition receptor,PRR）可以識別病原菌,PRR識別病原菌后,通過蛋白間的級聯(lián)反應(yīng),激活與免疫應(yīng)答相關(guān)的信號通路,產(chǎn)生細(xì)胞因子,進(jìn)一步激活適應(yīng)性免疫應(yīng)答,使機(jī)體形成一個完善的免疫應(yīng)答網(wǎng)絡(luò),從而更有效的消滅病原菌。本實驗主要研究卡介苗（Bacillus Calmette-Guerin Vaccine,BCG）感染RAW264.7細(xì)胞后,microRNA-29a（miR-29a）對其激活的Toll樣受體4/髓樣分化因子88（Toll-like receptor 4/Myeloid differentiation factor88,TLR4/MyD88）信號通路是否具有調(diào)控作用,為結(jié)核桿菌的致病機(jī)理或藥物靶標(biāo)的發(fā)掘提供實驗依據(jù)。方法:設(shè)置六個實驗組,分別是空白對照組、miR-29a抑制載體轉(zhuǎn)染組、空載轉(zhuǎn)染組、BC... 

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
前言
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 微小RNA對巨噬細(xì)胞發(fā)育和功能調(diào)節(jié)的研究進(jìn)展
        1.1 microRNAs對免疫細(xì)胞發(fā)育的調(diào)節(jié)
        1.2 microRNAs對巨噬細(xì)胞極化的調(diào)節(jié)
        1.3 miRNAs對巨噬細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)
            1.3.1 炎癥反應(yīng)
            1.3.2 抗原呈遞
            1.3.3 吞噬功能
            1.3.4 呼吸爆發(fā)
            1.3.5 巨噬細(xì)胞自噬
        1.4 miRNAs對巨噬細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)
        1.5 microRNAs與巨噬細(xì)胞相關(guān)疾病
        1.6 結(jié)語
    第二章 Toll樣受體及mi RNAs對其相關(guān)疾病調(diào)節(jié)作用的研究進(jìn)展
        2.1 TLRs的功能及其在疾病中的作用
        2.2 miRNAs與 TLRs相關(guān)疾病
            2.2.1 miRNAs與 TLRs受體相關(guān)感染性疾病
            2.2.2 miRNAs與 TLRs受體相關(guān)炎癥性疾病
            2.2.3 miRNAs與 TLRs受體相關(guān)系統(tǒng)性紅斑狼瘡
            2.2.4 miRNAs與 TLRs受體相關(guān)腫瘤
        2.3 結(jié)語
第二篇 研究內(nèi)容
    第一章 miR-29a對巨噬細(xì)胞TLR4/My D88 信號通路相關(guān)基因mRNA水平調(diào)節(jié)作用的研究
        1.1 材料
            1.1.1 細(xì)胞株、質(zhì)粒和菌種
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要儀器
            1.1.4 溶液配制
        1.2 方法
            1.2.1 卡介苗的培養(yǎng)及驗證
            1.2.2 質(zhì)粒提取及驗證
            1.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)
            1.2.4 細(xì)胞感染實驗
            1.2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗
            1.2.6 細(xì)胞RNA提取
            1.2.7 miRNA反轉(zhuǎn)錄及熒光定量PCR
            1.2.8 mRNA反轉(zhuǎn)錄及熒光定量PCR
            1.2.9 數(shù)據(jù)處理
        1.3 結(jié)果
            1.3.1 BCG的培養(yǎng)及驗證
            1.3.2 抑制載體電泳結(jié)果
            1.3.3 熒光定量PCR引物驗證結(jié)果
            1.3.4 結(jié)核分枝桿菌感染巨噬細(xì)胞結(jié)果
            1.3.5 六個實驗組TLR4/My D88 信號通路基因的表達(dá)情況
            1.3.6 六個實驗組中mi R-29a的表達(dá)情況
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第二章 miR-29a對巨噬細(xì)胞TLR4/MyD88 信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平調(diào)節(jié)作用的研究
        2.1 材料
            2.1.1 細(xì)胞株、質(zhì)粒和菌種
            2.1.2 主要試劑及材料
            2.1.3 主要儀器
            2.1.4 主要溶液配制
        2.2 方法
            2.2.1 卡介苗的培養(yǎng)及驗證
            2.2.2 質(zhì)粒提取及驗證
            2.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.4 細(xì)胞感染實驗
            2.2.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗
            2.2.6 細(xì)胞總蛋白提取
            2.2.7 BCA蛋白定量
            2.2.8 一氧化氮濃度測定(根據(jù)說明書操作)
            2.2.9 ELISA(雙抗體夾心法)
            2.2.10 Western Blot
        2.3 結(jié)果與分析
            2.3.1 蛋白質(zhì)BCA定量
            2.3.2 一氧化氮濃度檢測
            2.3.3 細(xì)胞因子的檢測
            2.3.4 Western Blot檢測通路關(guān)鍵基因
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
作者簡介
致謝



本文編號：3683800