目的:結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）是導致結核病（Tuberculosis,TB）的病原菌,其感染后主要寄生于巨噬細胞中。巨噬細胞是先天性免疫系統(tǒng)中的一員,細胞膜表面、胞內器室膜上存在模式識別受體（pattern recognition receptor,PRR）可以識別病原菌,PRR識別病原菌后,通過蛋白間的級聯(lián)反應,激活與免疫應答相關的信號通路,產生細胞因子,進一步激活適應性免疫應答,使機體形成一個完善的免疫應答網絡,從而更有效的消滅病原菌。本實驗主要研究卡介苗（Bacillus Calmette-Guerin Vaccine,BCG）感染RAW264.7細胞后,microRNA-29a（miR-29a）對其激活的Toll樣受體4/髓樣分化因子88（Toll-like receptor 4/Myeloid differentiation factor88,TLR4/MyD88）信號通路是否具有調控作用,為結核桿菌的致病機理或藥物靶標的發(fā)掘提供實驗依據(jù)。方法:設置六個實驗組,分別是空白對照組、miR-29a抑制載體轉染組、空載轉染組、BC... 

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
前言
第一篇 文獻綜述
    第一章 微小RNA對巨噬細胞發(fā)育和功能調節(jié)的研究進展
        1.1 microRNAs對免疫細胞發(fā)育的調節(jié)
        1.2 microRNAs對巨噬細胞極化的調節(jié)
        1.3 miRNAs對巨噬細胞功能的調節(jié)
            1.3.1 炎癥反應
            1.3.2 抗原呈遞
            1.3.3 吞噬功能
            1.3.4 呼吸爆發(fā)
            1.3.5 巨噬細胞自噬
        1.4 miRNAs對巨噬細胞凋亡的調節(jié)
        1.5 microRNAs與巨噬細胞相關疾病
        1.6 結語
    第二章 Toll樣受體及mi RNAs對其相關疾病調節(jié)作用的研究進展
        2.1 TLRs的功能及其在疾病中的作用
        2.2 miRNAs與 TLRs相關疾病
            2.2.1 miRNAs與 TLRs受體相關感染性疾病
            2.2.2 miRNAs與 TLRs受體相關炎癥性疾病
            2.2.3 miRNAs與 TLRs受體相關系統(tǒng)性紅斑狼瘡
            2.2.4 miRNAs與 TLRs受體相關腫瘤
        2.3 結語
第二篇 研究內容
    第一章 miR-29a對巨噬細胞TLR4/My D88 信號通路相關基因mRNA水平調節(jié)作用的研究
        1.1 材料
            1.1.1 細胞株、質粒和菌種
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要儀器
            1.1.4 溶液配制
        1.2 方法
            1.2.1 卡介苗的培養(yǎng)及驗證
            1.2.2 質粒提取及驗證
            1.2.3 細胞培養(yǎng)
            1.2.4 細胞感染實驗
            1.2.5 細胞轉染實驗
            1.2.6 細胞RNA提取
            1.2.7 miRNA反轉錄及熒光定量PCR
            1.2.8 mRNA反轉錄及熒光定量PCR
            1.2.9 數(shù)據(jù)處理
        1.3 結果
            1.3.1 BCG的培養(yǎng)及驗證
            1.3.2 抑制載體電泳結果
            1.3.3 熒光定量PCR引物驗證結果
            1.3.4 結核分枝桿菌感染巨噬細胞結果
            1.3.5 六個實驗組TLR4/My D88 信號通路基因的表達情況
            1.3.6 六個實驗組中mi R-29a的表達情況
        1.4 討論
        1.5 小結
    第二章 miR-29a對巨噬細胞TLR4/MyD88 信號通路相關蛋白表達水平調節(jié)作用的研究
        2.1 材料
            2.1.1 細胞株、質粒和菌種
            2.1.2 主要試劑及材料
            2.1.3 主要儀器
            2.1.4 主要溶液配制
        2.2 方法
            2.2.1 卡介苗的培養(yǎng)及驗證
            2.2.2 質粒提取及驗證
            2.2.3 細胞培養(yǎng)
            2.2.4 細胞感染實驗
            2.2.5 細胞轉染實驗
            2.2.6 細胞總蛋白提取
            2.2.7 BCA蛋白定量
            2.2.8 一氧化氮濃度測定(根據(jù)說明書操作)
            2.2.9 ELISA(雙抗體夾心法)
            2.2.10 Western Blot
        2.3 結果與分析
            2.3.1 蛋白質BCA定量
            2.3.2 一氧化氮濃度檢測
            2.3.3 細胞因子的檢測
            2.3.4 Western Blot檢測通路關鍵基因
        2.4 討論
        2.5 小結
結論
參考文獻
附錄
作者簡介
致謝



本文編號：3683800