背景:隨著過去十幾年社會工業(yè)化的進程,過敏性疾病的發(fā)生率也呈現(xiàn)出了上升的趨勢。芒果是一種重要的水果過敏原,食用、接觸芒果及其深加工產(chǎn)品都可能使過敏患者產(chǎn)生皮炎、口腔過敏綜合征、哮喘等嚴重的過敏反應(yīng)。截止目前,大多數(shù)相關(guān)的研究文獻還只是限于對病例的報道、病人血清IgE與芒果粗提蛋白的反應(yīng)性及交叉過敏的探究上,對芒果果實中蛋白質(zhì)類過敏原及其致敏機制的了解還十分匱乏。開展相關(guān)的研究工作,將為芒果過敏的精確診斷與治療提供依據(jù)。目的:（1）通過建立小鼠模型,探究芒果的致敏機制;（2）鑒定新的芒果過敏原,并對其免疫原性、抗原表位及分子結(jié)構(gòu)特征進行探究。方法:1)芒果致敏Balb/c小鼠過敏性氣道炎癥模型的建立將12只6-8周齡雌性Balb/c小鼠隨機分為兩組,模型組:在第0、3、7天腹腔注射150μl包含20μg芒果果實粗提蛋白（MCEP）+2 mg明礬佐劑的生理鹽水致敏,在第14、16、18、20天滴鼻50μg MCEP（20μl）進行激發(fā),對照組以相同體積的生理鹽水代替MCEP,第21天時處理小鼠。收集小鼠血清、肺泡灌洗液（BALF）以及脾細胞培養(yǎng)上清,檢測特異性抗體（IgE、IgG1）、細胞... 

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 芒果過敏研究綜述
    1.1 引言
    1.2 芒果過敏反應(yīng)類型
        1.2.1 速發(fā)型過敏反應(yīng)
        1.2.2 遲發(fā)型過敏反應(yīng)
    1.3 過敏原類型
        1.3.1 非蛋白質(zhì)類過敏原
        1.3.2 蛋白質(zhì)類過敏原
    1.4 交叉反應(yīng)
    1.5 討論
第2章 芒果致敏Balb/c小鼠過敏性氣道炎癥模型的建立
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 主要試劑及耗材
        2.2.2 主要試驗設(shè)備
        2.2.3 主要溶液配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 BCA法定量蛋白
        2.3.2 芒果果實粗提蛋白(MCEP)的制備及SDS-PAGE電泳
        2.3.3 動物模型建立
        2.3.4 間接ELISA測定血清中特異性IgE、IgG1、IgG2a
        2.3.5 WesternBlot分析血清中的MCEP特異性IgE、IgG1
        2.3.6 小鼠脾細胞體外培養(yǎng)及細胞因子檢測
        2.3.7 肺泡灌洗液及細胞甩片
        2.3.8 肺組織包埋及H&E、PAS染色
        2.3.9 肺組織炎癥評分及支氣管粘液分泌評分
        2.3.10 數(shù)據(jù)分析
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 芒果果實總蛋白SDS-PAGE分析
        2.4.2 血清中特異性抗體及mMCP-
        2.4.3 脾細胞培養(yǎng)上清中細胞因子的表達
        2.4.4 肺泡灌洗液中細胞因子的表達
        2.4.5 Westernblot分析血清中特異性抗體
        2.4.6 肺泡灌洗液細胞分類、計數(shù)
        2.4.7 H&E及PAS染色分析
    2.5 討論
第3章 芒果新主要過敏原幾丁質(zhì)酶的克隆表達及免疫學(xué)鑒定
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 主要試劑及耗材
        3.2.2 主要試驗設(shè)備
        3.2.3 芒果過敏患者血清
        3.2.4 主要溶液配制
    3.3 實驗方法
        3.3.1 芒果果實粗提蛋白的制備及SDS-PAGE電泳
        3.3.2 Dotblot及westernblot
        3.3.3 shotgun質(zhì)譜鑒定
        3.3.4 基因合成及質(zhì)粒構(gòu)建
        3.3.5 感受態(tài)細胞制備
        3.3.6 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
        3.3.7 重組蛋白誘導(dǎo)表達
        3.3.8 帶His標(biāo)簽蛋白純化
        3.3.9 包涵體蛋白復(fù)性
        3.3.10 DEAE弱陰離子柱純化蛋白步驟
        3.3.11 重組芒果幾丁質(zhì)酶免疫學(xué)鑒定
        3.3.12 生物信息學(xué)分析
        3.3.13 線性IgE結(jié)合表位預(yù)測及鑒定
    3.4 結(jié)果分析
        3.4.1 芒果果實粗提蛋白SDS-PAGE電泳及westernblot分析
        3.4.2 shotgun結(jié)果
        3.4.3 幾丁質(zhì)酶基因合成及質(zhì)粒構(gòu)建
        3.4.4 重組蛋白誘導(dǎo)表達
        3.4.5 蛋白純化
        3.4.6 重組芒果幾丁質(zhì)酶免疫學(xué)鑒定
        3.4.7 芒果幾丁質(zhì)酶生物信息學(xué)分析及線性IgE結(jié)合表位鑒定
    3.5 討論
參考文獻
英文縮略詞表
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3671897