目的比較不同總RNA提取方法及不同反轉(zhuǎn)錄引物對(duì)喉鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株Hep2細(xì)胞環(huán)狀RAN擴(kuò)增的影響,進(jìn)一步為環(huán)狀RNA鑒定與擴(kuò)增提供可靠的實(shí)驗(yàn)方法。方法使用Trizol抽提法和miRNeasy Mini試劑盒提取Hep2細(xì)胞中的總RNA;Nanodrop 2000對(duì)總RNA進(jìn)行定量及純度測(cè)定;使用隨機(jī)引物和通用引物分別對(duì)總RNA進(jìn)步反轉(zhuǎn)錄;實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)Hep2細(xì)胞中環(huán)狀RNA-circHIPK3及circFLNA的表達(dá)。結(jié)果 Trizol抽提法提取的RNA濃度和RNA總量高于miRNeasy Mini試劑盒提取的RNA總濃度結(jié)果（P<0.01）,但應(yīng)用miRNeasy Mini試劑盒提取的RNA純度要高于Trizol抽提法（P<0.05）,應(yīng)用隨機(jī)引物反轉(zhuǎn)錄,能擴(kuò)增出circHIPK3和circFLNA,而利用通用引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,circHIPK3及circFLNA不能被擴(kuò)增;另外,利用miRNeasy Mini試劑盒法提取總RNA后所擴(kuò)增出circHIPK3及circFLNA的相對(duì)表達(dá)量明顯高于Trizol抽提法（P<0.01）。結(jié)論 miRNeasy M... 

【文章來源】：河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,41(04)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材 料 與 方 法
    1.1 細(xì)胞培養(yǎng)
    1.2 miRNeasy Mini試劑盒提取總RNA
    1.3 Trizol抽提法提取總RNA方法
    1.4 RNA濃度及質(zhì)量檢測(cè)
    1.5 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和過程
    1.6 實(shí)時(shí)定量PCR(real-time quantitative PCR)
    1.7 瓊脂糖凝膠電泳
    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié) 果
    2.1 miRNeasy Mini試劑盒法與Trizol抽提法提取細(xì)胞總RNA的濃度及總量比較
    2.2 miRNeasy Mini試劑盒法與Trizol抽提法提取細(xì)胞總RNA的純度比較
    2.3 隨機(jī)引物及通用引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄對(duì)對(duì)環(huán)狀RNA擴(kuò)增的影響
    2.4 不同方法提取總RNA對(duì)環(huán)狀RNA實(shí)時(shí)定量PCR相對(duì)表達(dá)量的影響
3 討 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]環(huán)狀RNA及其作為疾病標(biāo)志物的潛能[J]. 許勝,周露玙,王昆.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2018(02)
[2]環(huán)狀RNA:一種基因調(diào)控RNA[J]. 陳丹峰,張卓,荊清.  生命的化學(xué). 2016(06)
[3]環(huán)狀RNA研究進(jìn)展及臨床應(yīng)用[J]. 孔德沛,訾曉淵,孫穎浩.  第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(03)
[4]環(huán)狀RNA的生物學(xué)功能及其在疾病發(fā)生中的作用[J]. 李培飛,陳聲燦,邵永富,蔣孝明,肖丙秀,郭俊明.  生物物理學(xué)報(bào). 2014(01)



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