目的:表觀遺傳相關(guān)代謝物（epigenetics related metabolites）是與表觀遺傳修飾相關(guān)的,在酶與非酶反應(yīng)中直接的底物或輔因子,它們在表觀遺傳調(diào)控中決定了表觀遺傳修飾的方式與作用強(qiáng)度。我們把這些表觀遺傳相關(guān)代謝物的集合稱作表觀遺傳代謝組（epigenetic metabolome）。研究發(fā)現(xiàn)在特定疾病狀態(tài)下某些表觀遺傳代謝相關(guān)代謝物水平發(fā)生改變,補(bǔ)充或限制某些表觀遺傳相關(guān)代謝物能夠影響疾病的發(fā)生進(jìn)展,因此,表觀遺傳代謝組與疾病密切相關(guān)。目前對于表觀遺傳的研究注重于直接研究某一種單一修飾,受方法學(xué)的限制,尚未有研究專門從代謝的角度系統(tǒng)性地研究表觀遺傳相關(guān)代謝產(chǎn)物對表觀遺傳學(xué)的作用。代謝組學(xué)可從底物、輔因子的角度一次性評估多種修飾能否發(fā)生的可能性和修飾酶的活性。所以本實(shí)驗(yàn)的目的是基于高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法建立系統(tǒng)性的靶向代謝組學(xué)方法,用以測定生物樣本中的表觀遺傳代謝組。方法:依據(jù)表觀遺傳修飾作用方式和相關(guān)的酶,我們整理了DNA和組蛋白甲基化、去甲基化,組蛋白乙�；捌渌；�、去乙酰化,O-連接的糖基化相關(guān)代謝物,共五類34種。根據(jù)化合物的結(jié)構(gòu)與極性,將整理的表觀... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市211工程院校

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

NAD+合成通路圖

圖 1.2 甲硫氨酸循環(huán)圖謝組學(xué)研究表觀遺傳表觀遺傳調(diào)控與生物體生長發(fā)育和多種疾病密切相關(guān)，逐漸成為基因的研究熱點(diǎn)。隨著表觀遺傳研究的深入，對表觀遺傳修飾的各種研究開發(fā)出來，逐漸向高靈敏度，高通量或高特異性發(fā)展。目前對表觀遺方法研究主要利用限制性內(nèi)切酶、重亞硫酸鹽（bisulfite）處理以及免定技術(shù)等對 DNA 甲基化，組蛋白修飾進(jìn)行研究。這些方法不可避免的能對某一種表觀遺傳修飾或某單一位點(diǎn)進(jìn)行直接測定，而不能在未知的情況下，從整體對表觀遺傳進(jìn)行考察。代謝組學(xué)作為研究整體代謝的有效方法，逐漸在表觀遺傳研究中被開發(fā)利用起來。代謝組學(xué)是對一個(gè)生物系統(tǒng)的細(xì)胞在給定時(shí)間和條件下所有小分子代定性定量分析,從而定量描述生物內(nèi)源性代謝物質(zhì)的整體及其對內(nèi)因和應(yīng)答規(guī)律的科學(xué)[7]。代謝組學(xué)被定義為“生命系統(tǒng)對病理生理刺激或遺

圖 2.1 NAD+合成代謝通路及輔酶 A 類代謝物氨基柱色譜圖a 圖為 12 種 NAD+合成代謝通路（包括 ADP，ATP）及輔酶 A 類代謝物總離子圖，b圖為輔酶 A 類代謝物的提取離子圖。我們又嘗試在反相柱上加入離子對試劑進(jìn)行色譜分離。配制濃度為 1ug/ml的包含所有34種代謝物的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，選擇正/負(fù)離子切換模式，采用流動(dòng)相A：100%純化水加 5mM 乙酸銨，流動(dòng)相 B：100%乙腈，40 分鐘梯度從%98 水相到5%水相進(jìn)行洗脫，流速為 0.25ml/min。色譜結(jié)果見圖 2.2。由圖可以看出，除了輔酶 A 類代謝物在 C18 柱上，流動(dòng)相中加入乙酸銨后獲得滿意的分離度，其他24 種代謝物大多都在約 2 分鐘時(shí)間洗脫出來，沒有保留。


本文編號：3626204