目的循環(huán)中游離線粒體DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）是膿毒癥后免疫抑制的關(guān)鍵分子,巨噬細(xì)胞mtDNA是循環(huán)中游離mtDNA的主要來(lái)源之一,本研究擬探討程序性壞死在巨噬細(xì)胞釋放mtDNA中的作用。方法用脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）構(gòu)建小鼠巨噬細(xì)胞mtDNA釋放的細(xì)胞模型。分別應(yīng)用凋亡抑制劑z-VAD、RIPK1特異性抑制劑Nec-1、RIPK3特異性抑制劑GSK’872處理細(xì)胞1h后,然后LPS處理24h。觀察LPS處理巨噬細(xì)胞后mtDNA、核DNA釋放情況的分組為:Control組（滅菌水）、1μg/ml LPS組;觀察LPS處理巨噬細(xì)胞后程序性壞死發(fā)生情況的分組為:Control組（DMSO）、z-VAD組、Nec-1組、GSK’872組、1μg/ml LPS組、z-VAD+1μg/ml LPS組、Nec-1+1μg/ml LPS組、GSK’872+1μg/ml LPS組;觀察程序性壞死在mtDNA釋放中的作用的分組為:Control組（DMSO）、Nec-1組、GSK’872組、Nec-1+1μg/ml LPS組、GSK’872+1... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：86 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

LPS促進(jìn)巨噬細(xì)胞線粒體DNA、核DNA釋放到胞外

macrophages for 24h. qPCR was used to measure the release of extracellular mitochogenes D-LOOP/COX I and nuclear gene 18S. The cycle threshold (Ct value) displayresult. The lower the Ct value is, the higher the DNA content is. Mean±SD. n=3, **P<0Control group.2.2 LPS 促進(jìn)巨噬細(xì)胞 mtDNA 釋放到胞漿應(yīng)激發(fā)生后，mtDNA、核 DNA 從胞漿釋放到胞外，那么其在胞漿中是變化的呢？1μg/ml LPS 處理巨噬細(xì)胞 24h 后，應(yīng)用 qPCR 方法檢測(cè)胞漿 D量， Ct 值表示結(jié)果，Ct 值越低，DNA 含量越高。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，胞漿中線粒體D-LOOP/COX I、核基因 18S 分泌量增加（圖 2. D-LOOP 組：LPS vs. Co＜0.05，COX I 組：LPS vs. Control P＜0.05，18S 組：LPS vs. Control P＞P value=0.05）。然后觀察胞漿中線粒體 DNA 與核 DNA 的含量是否也存在差實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)胞漿中線粒體基因 D-LOOP/COXI 含量高于核基因 18S（圖 2.D-vs. 18S P＜0.01，COX I vs. 18S P＜0.01；P value=0.05）。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文value is, the higher the DNA content is. Mean±SD. n=3, *P<0.05 vs. C2.3 LPS 促進(jìn)巨噬細(xì)胞 mtDNA 拷貝數(shù)增加LPS 刺激巨噬細(xì)胞后，mtDNA、核 DNA 分泌到胞漿、胞外應(yīng)激狀態(tài)下，對(duì)胞內(nèi) DNA 的拷貝合成影響如何？1μg/ml LPS 處后，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（qPCR）方法檢測(cè)胞內(nèi) DNA 拷貝數(shù)的倍數(shù)進(jìn)行比較。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，胞內(nèi)線粒體基因 D-LOOP/COXI 拷有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而核基因 18s 沒(méi)有明顯變化（圖 3. D-LOOP 組：P＜0.05，COX I 組：LPS vs. Control P＜0.01，18S 組：LPS vs. CP value=0.05）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]試驗(yàn)序貫分析軟件在Meta分析中的應(yīng)用[J]. 翁鴻,李勝,曾憲濤,武珊珊,劉晴,王行環(huán).  中國(guó)循證醫(yī)學(xué)雜志. 2016(05)
[2]試驗(yàn)序貫分析與Meta分析所需樣本量的估算[J]. 王權(quán),田金徽,李倫,何曦冉,黃迪,葛龍,楊克虎.  蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2015(04)
[3]系統(tǒng)綜述或Meta分析的樣本量估算——試驗(yàn)序貫分析[J]. 夏蕓,孫瑛,劉兆蘭,劉建平.  北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)(中醫(yī)臨床版). 2013(05)



本文編號(hào)：3591839