目的從家蠅的EST測序數(shù)據(jù)庫中篩選獲得家蠅幾丁質(zhì)酶基因8（MDCht8）,對其進(jìn)行分子特性分析,探討Cht8基因在家蠅不同組織和發(fā)育時(shí)期的時(shí)空表達(dá)模式及其在家蠅免疫防御中的功能。方法克隆MDCht8基因,借助MEGA 5.0軟件采用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹;采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測MDCht8基因時(shí)空表達(dá)模式及微生物誘導(dǎo)后不同時(shí)間點(diǎn)（3、6、12、18、24、36、48h）MDCht8基因表達(dá)水平的變化。結(jié)果 MDCht8基因的ORF框全長1 512bp,編碼一個(gè)含503個(gè)氨基酸的蛋白多肽,理論相對分子質(zhì)量約為56.801 7×10³,進(jìn)化樹分析顯示該蛋白與果蠅Cht8遺傳距離較近。時(shí)空表達(dá)模式分析顯示,MDCht8基因在2齡幼蟲和3齡幼蟲內(nèi)表達(dá)量較高,家蠅3齡幼蟲的各主要組織中以唾液腺和中腸中的表達(dá)水平較高。經(jīng)白色念珠菌和大腸埃希菌誘導(dǎo)后,家蠅MDCht8基因出現(xiàn)明顯上調(diào),金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)后未表現(xiàn)出明顯上調(diào)。成功克隆了MDCht8基因,PCR擴(kuò)增片段為1 512bp,與預(yù)期相符。結(jié)論初步揭示了MDCht8基因在家蠅不同蟲期,不同組織表達(dá)量不同,提示幾丁質(zhì)酶基因在... 

【文章來源】：中國病原生物學(xué)雜志. 2020,15(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

BLAST中MDCht8基因保守結(jié)構(gòu)域分析

MDCht8進(jìn)化樹繪制所選序列分別來自家蠅（Musca domestica,MD），果蠅（Drosophila melanogaster,DM），岡比亞按蚊（Anopheles gambiae,Ag），赤擬谷盜（Tribolium castaneum,Tc），桔小實(shí)蠅（Bactrocera dorsalis,Bd），水稻條莖螟（Chilo suppressalis,Cs）。進(jìn)化樹顯示，MDCht8屬于幾丁質(zhì)酶第4組，與果蠅的DmCht8遺傳距離較近（圖2）。2 MDCht8基因cDNA克隆

MD-Cht8基因在家蠅的卵、1齡幼蟲、2齡幼蟲、3齡幼蟲、蛹和雌雄蠅各生長階段中有不同程度的表達(dá)，以卵期作為參照，1齡幼蟲、2齡幼蟲、3齡幼蟲、蛹和雄蠅上調(diào)倍數(shù)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。MDCht8基因表達(dá)程度：2齡幼蟲>3齡幼蟲>1齡幼蟲>雄蟲>蛹>雌蟲>卵（圖4）。圖4 家蠅生活史不同發(fā)育期MDCht8基因的表達(dá)情況


本文編號：3583444