目的制備出一種bpV（pic）的控制釋放體系,并驗(yàn)證其對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)以及促進(jìn)軸突生長(zhǎng)的作用。方法用單乳化-溶劑揮發(fā)法制備出PLLA/bpV（pic）微球并對(duì)其進(jìn)行表征。將神經(jīng)干細(xì)胞以及背根神經(jīng)節(jié)分別分為3組:普通培養(yǎng)基組、PLLA微球組、PLLA/bpV（pic）組,分別加入DMEM培養(yǎng)基,含有PLLA微球的DMEM培養(yǎng)基,以及含有PLLA/bpV（pic）微球的DMEM培養(yǎng)基。通過死活細(xì)胞鑒定以及軸突長(zhǎng)度測(cè)量評(píng)價(jià)PLLA/bpV（pic）組微球?qū)?xì)胞的保護(hù)作用以及軸突生長(zhǎng)的促進(jìn)作用。結(jié)果 PLLA/bpV（pic）微球的成球率為（88.2±5.6）%,粒徑大小為（16.8±3.1）%,載藥量為（4.05±0.3）%,包封率為（48.5±1.8）%,釋放時(shí)間可達(dá)30 d。PLLA/bpV（pic）組細(xì)胞存活率為（95.2±4.77）%,背根神經(jīng)節(jié)軸突長(zhǎng)度為（718±95）μm,均明顯高于普通培養(yǎng)基組和PLLA微球組。結(jié)論初步試驗(yàn)結(jié)果證明采用單乳化-溶劑揮發(fā)法成功制備出PLLA/bpV（pic）微球,該微球?qū)ι窠?jīng)細(xì)胞存活以及背根神經(jīng)節(jié)軸突生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)作用。 

【文章來源】：廣東醫(yī)學(xué). 2013,34(17)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：4 頁(yè)

【部分圖文】：

PLLA/bpV(pic)微球釋放曲線

2．3PLLA/bpV(pic)微球?qū)ι窠?jīng)干細(xì)胞存活率的影響細(xì)胞在加入普通培養(yǎng)基的孔板里的存活率為(90.4±3.77)%，在含有單純PLLA微球培養(yǎng)基的存活率為(89.4±3.47)%，而在含有PLLA/bpV(pic)微球的培養(yǎng)基里的存活率為(95.2±4.77)%，與普通培養(yǎng)基和PLLA培養(yǎng)基相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見圖3。死細(xì)胞顯示為紅色(A1、B1、C1)，細(xì)胞核顯示為藍(lán)色(A2、B2、C2)圖3細(xì)胞live－dead染色(×400)2．4PLLA/bpV(pic)微球?qū)ＲG軸突生長(zhǎng)的促進(jìn)作用如圖4所示，普通培養(yǎng)基組和加入還有空白PLLA微球組分別為(201±34)μm和(197±24)μm，DＲG軸突長(zhǎng)度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在含有PLLA/bpV(pic)微球中，DＲG軸突的長(zhǎng)度最長(zhǎng)，達(dá)到(718±95)μm，明顯長(zhǎng)于普通培養(yǎng)基組和PLLA微球組(P＜0.05)。A:普通培養(yǎng)組;B:PLLA微球組;C:PLLA/bpV(pic)微球組;標(biāo)尺長(zhǎng)度為500μm圖4DＲGNF－200免疫熒光染色3討論P(yáng)TEN基因(phosphataseandtensinhomologuedele-tedonchromosometo)又叫張力蛋白同源物基因，是一種具有雙特異磷酸酶活性的抑癌基因，不僅有脂質(zhì)磷酸酶活性，而且有蛋白磷酸酶活性，在胚胎發(fā)育過程中表達(dá)很低，成年時(shí)高表達(dá)，具有抑制發(fā)育完成后細(xì)胞的過度增殖，促進(jìn)凋亡的作用，但這也同時(shí)成為成年哺乳動(dòng)物CNS損傷后軸突再生困難的主要原因之一［4］。2008年，PAＲK等［1］證實(shí)PTEN基因敲除的小鼠較野生型小鼠在視神經(jīng)損傷后有顯著的再生能力增強(qiáng)。ABE等［5］通過敲出小鼠的結(jié)節(jié)性腦硬化復(fù)合物(Tsc)2基因，解除了Tsc2對(duì)哺乳動(dòng)物mTOＲ的抑制，提高mTOＲ的活性，從而增強(qiáng)DＲG中神經(jīng)元軸突的內(nèi)源性再生能力。LIU等［6］敲除小鼠PTEN基因后，證實(shí)能增強(qiáng)皮質(zhì)脊髓束神經(jīng)元的軸突再生能力。CHＲIS-TIE等［7］在體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)證?

?蚉LLA培養(yǎng)基相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見圖3。死細(xì)胞顯示為紅色(A1、B1、C1)，細(xì)胞核顯示為藍(lán)色(A2、B2、C2)圖3細(xì)胞live－dead染色(×400)2．4PLLA/bpV(pic)微球?qū)ＲG軸突生長(zhǎng)的促進(jìn)作用如圖4所示，普通培養(yǎng)基組和加入還有空白PLLA微球組分別為(201±34)μm和(197±24)μm，DＲG軸突長(zhǎng)度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在含有PLLA/bpV(pic)微球中，DＲG軸突的長(zhǎng)度最長(zhǎng)，達(dá)到(718±95)μm，明顯長(zhǎng)于普通培養(yǎng)基組和PLLA微球組(P＜0.05)。A:普通培養(yǎng)組;B:PLLA微球組;C:PLLA/bpV(pic)微球組;標(biāo)尺長(zhǎng)度為500μm圖4DＲGNF－200免疫熒光染色3討論P(yáng)TEN基因(phosphataseandtensinhomologuedele-tedonchromosometo)又叫張力蛋白同源物基因，是一種具有雙特異磷酸酶活性的抑癌基因，不僅有脂質(zhì)磷酸酶活性，而且有蛋白磷酸酶活性，在胚胎發(fā)育過程中表達(dá)很低，成年時(shí)高表達(dá)，具有抑制發(fā)育完成后細(xì)胞的過度增殖，促進(jìn)凋亡的作用，但這也同時(shí)成為成年哺乳動(dòng)物CNS損傷后軸突再生困難的主要原因之一［4］。2008年，PAＲK等［1］證實(shí)PTEN基因敲除的小鼠較野生型小鼠在視神經(jīng)損傷后有顯著的再生能力增強(qiáng)。ABE等［5］通過敲出小鼠的結(jié)節(jié)性腦硬化復(fù)合物(Tsc)2基因，解除了Tsc2對(duì)哺乳動(dòng)物mTOＲ的抑制，提高mTOＲ的活性，從而增強(qiáng)DＲG中神經(jīng)元軸突的內(nèi)源性再生能力。LIU等［6］敲除小鼠PTEN基因后，證實(shí)能增強(qiáng)皮質(zhì)脊髓束神經(jīng)元的軸突再生能力。CHＲIS-TIE等［7］在體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)運(yùn)用PTENsiＲNA及PTEN抑制劑bpV(pic)，可以顯著增強(qiáng)周圍神經(jīng)損傷后軸突的再生能力。KUＲIMOTO等［8］聯(lián)合提高cAMP及PTEN基因敲除，證明能顯著促進(jìn)視神經(jīng)損傷后軸突的再生。bpV(pic)在脊髓損傷中具有重要的治療價(jià)值已經(jīng)被證明，?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]以PTEN為靶點(diǎn)促進(jìn)CNS再生修復(fù)的研究進(jìn)展[J]. 楊萍.  生理科學(xué)進(jìn)展. 2010(04)
[2]PTEN在神經(jīng)元損傷和腦功能障礙中的作用[J]. 吳宏日,王云超,蔡其燕.  醫(yī)學(xué)綜述. 2010(11)



本文編號(hào)：3583119