目的設(shè)計(jì)構(gòu)建針對沙眼衣原體（Chlamydia trachomatis,Ct）具有高效抑制作用的重組蛋白,為衣原體治療抵抗探索新的解決方法。方法通過生物信息學(xué)方法設(shè)計(jì)VP1Cm蛋白的基因序列。應(yīng)用基因合成的方法構(gòu)建重組質(zhì)粒VP1Cm-pET28a（+）并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中。用帶Ni⁺的親和樹脂純化蛋白,梯度透析復(fù)性蛋白。CCK8法測定重組蛋白對Hela細(xì)胞的毒性作用。將豚鼠嗜衣原體噬菌體PhiCPG1衣殼蛋白VP1、截短蛋白VP1C、蛋白VP1Cm、桿菌肽和磷酸鹽緩沖溶液（PBS）分別與E型Ct標(biāo)準(zhǔn)株于室溫下預(yù)孵育3 h后接種至Hela細(xì)胞,同時(shí)設(shè)置Ct感染對照組。48 h后免疫熒光染色計(jì)數(shù)包涵體。多組樣本均數(shù)間比較用單因素ANOVA分析,兩樣本均數(shù)間比較用Bonferroni檢驗(yàn)。結(jié)果成功表達(dá)并純化出蛋白VP1Cm。在相同濃度時(shí),PhiCPG1衣殼蛋白VP1、截短蛋白VP1C和蛋白VP1Cm對Ct的抑制率分別為76.20%、85.13%和90.01%。結(jié)論經(jīng)設(shè)計(jì)過的蛋白VP1Cm對Ct的抑制效果優(yōu)于PhiCPG1衣殼蛋白VP1及其功能結(jié)構(gòu)域截短蛋白VP1C。 

【文章來源】：中國皮膚性病學(xué)雜志. 2020,34(09)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

PhiCPG1的 VP1基因序列與從臨床標(biāo)本中篩查出的VP1基因序列的BLAST比對結(jié)果

重組質(zhì)粒VP1Cm-pET28a(+)酶切鑒定結(jié)果

重組蛋白表達(dá)、純化與Western blot鑒定結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]M13-IN5重組噬菌體的構(gòu)建與鑒定及其對沙眼衣原體的作用研究[J]. 練婷婷,魏世娟,劉原君,任杰,王生,郭媛麗,郭睿,劉全忠,邵麗麗.  中華皮膚科雜志. 2018 (12)
[2]衣原體噬菌體phiCPG1衣殼蛋白Vp1的空間結(jié)構(gòu)分析及分段克隆表達(dá)[J]. 周全,劉原君,孫長貴,郭媛麗,馬璟玥,鄭蕾,劉全忠.  中國皮膚性病學(xué)雜志. 2016(05)
[3]衣原體噬菌體phiCPG1衣殼蛋白Vp1對豚鼠結(jié)膜炎衣原體及E型沙眼衣原體的抑制作用[J]. 孫長貴,周全,馬璟玥,郭媛麗,劉原君,劉全忠.  中華皮膚科雜志. 2016 (05)
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[5]衣原體噬菌體phiCPG1衣殼蛋白Vp1對沙眼衣原體的作用研究[J]. 劉原君,侯淑萍,衛(wèi)酒榮,李燕,齊蔓莉,王惠平,劉全忠.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2012 (05)
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本文編號：3554543