目的探討兩種不同佐劑CpG和納米乳（Nanoemulsion）對病毒滅活疫苗免疫效果的影響。方法以滅活豬德爾塔冠狀病毒（PDCoV）培養(yǎng)液為例,將骨髓來源樹突狀細(xì)胞（BMDC）與含有不同免疫佐劑的PDCoV滅活疫苗共孵育。抗體染色后使用流式細(xì)胞儀檢測BMDC成熟、活化情況。成年健康C57BL/6J雌性小鼠20只,鼠齡6～8周;隨機分成4組,分別接種磷酸鹽緩沖溶液（PBS）、滅活PDCoV液、CpG/PDCoV疫苗和Nanoemulsion/PDCoV疫苗,皮下免疫3次,時間間隔為1周;第21天殺死小鼠獲取脾臟和血液,檢測不同PDCoV滅活疫苗接種小鼠免疫反應(yīng)情況。結(jié)果 Nanoemulsion可負(fù)載滅活PDCoV的抗原成分,形成平均粒徑為（157.6±0.4） nm的納米粒,而CpG與滅活PDCoV則是無規(guī)則混合。Cp G/PDCoV組或Nanoemulsion/PDCoV組促BMDC成熟程度分別為45.57%和53.32%（CD86+MHCⅡ+BMDC）,明顯高于PDCoV組（38.49%）,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P <0.01、P <0.05）。第21天,CpG/PDCoV... 

【文章來源】：生物醫(yī)學(xué)工程與臨床. 2020,24(05)

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

Nanoemulsion(A）和Nanoemulsion/PDCo V疫苗（B）的粒徑分布曲線

將不同疫苗與BMDC共培養(yǎng)，抗體染色后用流式細(xì)胞儀檢測BMDC表面相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)。如圖2所示，Cp G/PDCo V組和Nanoemulsion/PDCo V組引起CD86+MHCⅡ+BMDC比例分別為53.32%、45.57%，明顯高于PBS組（26.51%）和PDCo V組（38.49%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Cp G/PDCo V組vs PBS組：t=12.45,F=6.84,P<0.001。Cp G/PDCo V組vs PDCo V組：t=4.54,F=1.63,P<0.01。Nanoemulsion/PDCo V組vs PBS組：t=9.41,F=5.94,P<0.001。Nanoemulsion/PDCo V組vs PDCo V組：t=2.23,F=1.88,P<0.05）。PBS組與PDCo V組間差異同樣存在統(tǒng)計學(xué)意義（t=4.47,F=11.18,P<0.01）。這些結(jié)果說明單純PDCo V能夠促進(jìn)BMDC成熟，佐劑的加入顯著提高了疫苗激活BMDC的效果。2.3 滅活疫苗體內(nèi)免疫效果

病毒可以利用宿主細(xì)胞系統(tǒng)進(jìn)行增殖，在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生大量的病毒顆粒，致使細(xì)胞發(fā)生病變、死亡甚至癌變。病毒疫苗需要誘導(dǎo)細(xì)胞免疫殺死機體內(nèi)被感染的細(xì)胞，釋放胞內(nèi)病毒，進(jìn)而需要特異性抗體清除胞外病毒，從而對該病達(dá)到防控效果。筆者通過兩種不同作用機制佐劑（Cp G和Nanoemulsion）分別與含有抗原成分的PDCo V培養(yǎng)液混合制備PDCo V滅活疫苗來探討其對滅活PDCo V免疫效果的影響。Cp G是一種Toll樣受體-9(Toll-like receptor 9,TLR-9）激動劑，活化樹突狀細(xì)胞（dendritic cells,DC），促進(jìn)Th1型細(xì)胞免疫；Nanoemulsion是一種遞送載體，促進(jìn)DC對抗原的胞吞和呈遞。PDCo V培養(yǎng)液與Nanoemulsion混合，可能會導(dǎo)致一些抗原成分，比如蛋白、核酸等吸附在納米粒表面或負(fù)載到Nanoemulsion中，形成粒徑均一的納米疫苗。筆者實驗通過DLS分析佐劑和疫苗粒徑大小及分散度。Nanoemulsion負(fù)載滅活PDCo V抗原成分之后粒徑大小和分布沒有發(fā)生明顯的變化，說明Nanoemulsion可以較好地封裝病毒抗原成分，起到保護(hù)和緩釋抗原的效果，而且100～200 nm大小的納米粒有利于淋巴結(jié)的聚集，從而促進(jìn)機體免疫應(yīng)答[7]。然而，Cp G和滅活PDCo V并未發(fā)生共組裝，只是形成簡單的混合物。


本文編號：3546186