本文關(guān)鍵詞：VIP對jurkat淋巴細(xì)胞株CD4表達(dá)的影響及其可能機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景:血管活性腸肽(Vasoactive intestinal peptide,VIP)是一種常見的神經(jīng)肽,已有大量研究證實(shí)腫瘤細(xì)胞可分泌VIP,并且對多種免疫細(xì)胞均有調(diào)節(jié)作用,可促進(jìn)CD4~+T淋巴細(xì)胞向Th2分化,但其對于T淋巴細(xì)胞CD4/CD8表型的影響尚未見報(bào)道。Thpok是T淋巴細(xì)胞分化中重要而必需的轉(zhuǎn)錄因子,在陽性選擇過程中促進(jìn)雙陽性T淋巴細(xì)胞向CD4~+T淋巴細(xì)胞分化,并且維持成熟T淋巴細(xì)胞CD4的表型及抑制CD8分子的表達(dá)。Thpok與轉(zhuǎn)錄因子Runx3的相互拮抗作用環(huán)是調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞CD4/CD8分化的關(guān)鍵,而GATA3則在此過程中與Thpok表現(xiàn)出協(xié)同作用。T淋巴細(xì)胞的分化過程目前已逐漸明了,但關(guān)于已分化成熟的T淋巴細(xì)胞表型的改變的研究卻很少。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)胃癌組織中CD4表達(dá)較癌旁組織明顯升高,轉(zhuǎn)錄因子Thpok也呈現(xiàn)相應(yīng)的變化,因此,我們推測腫瘤細(xì)胞可能通過分泌VIP促使已分化成熟的T淋巴細(xì)胞表型發(fā)生改變,并且該變化與Thpok等轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)。為此,我們設(shè)計(jì)體外實(shí)驗(yàn)探究VIP對jurkat淋巴細(xì)胞株CD4表達(dá)的影響及其可能機(jī)制。目的:體外實(shí)驗(yàn)探究VIP對jurkat淋巴細(xì)胞株CD4表達(dá)的影響及其可能的機(jī)制。方法:分別檢測不同淋巴細(xì)胞株jurkat與molt-4之間CD4/CD8的表達(dá)及轉(zhuǎn)錄因子Thpok、Runx3及GATA3之間的差異;用VIP分別作用于靜息狀態(tài)下的jurkat細(xì)胞及經(jīng)PMA+離子霉素活化的jurkat細(xì)胞后,用流式細(xì)胞術(shù)檢測經(jīng)藥物作用后的各組細(xì)胞CD4及CD8表達(dá)的變化情況,用熒光定量PCR及免疫印跡法分別檢測Thpok、GATA3、Runx3的mRNA及蛋白變化。分析不同淋巴細(xì)胞株之間CD4/CD8表型不同的原因,探究各實(shí)驗(yàn)組間jurkat細(xì)胞CD4表達(dá)差異的可能的機(jī)制。結(jié)果:1.jurkat細(xì)胞表面有VPAC1和VPAC2表達(dá);2.jurkat細(xì)胞高表達(dá)CD4,molt-4細(xì)胞高表達(dá)CD8(p0.05);jurkat細(xì)胞的Thpok及Runx3的表達(dá)水平均明顯高于molt-4細(xì)胞(p0.05),但二者間Thpok的差異更為顯著;3.當(dāng)10~(-6)M VIP作用于jurkat細(xì)胞時(shí),Thpok的表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05),VIP作用于jurkat細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)濃度為10~(-6)M;4.jurkat細(xì)胞活化后CD4、CD8的表達(dá)均上調(diào),聯(lián)合VIP作用后CD4表達(dá)進(jìn)一步增加(p0.05);5.a.jurkat細(xì)胞活化后Thpok mRNA表達(dá)上調(diào),聯(lián)合VIP作用后進(jìn)一步增加(p0.05);b.jurkat細(xì)胞活化后Runx3 mRNA及蛋白表達(dá)均明顯上調(diào)(P0.05);c.VIP刺激靜息狀態(tài)下的jurkat細(xì)胞GATA3蛋白表達(dá)呈上調(diào)趨勢。結(jié)論:1.已分化成熟的jurkat細(xì)胞仍具有可塑性,活化后CD4、CD8的表達(dá)均可上調(diào);2.VIP可誘導(dǎo)活化狀態(tài)下jurkat細(xì)胞CD4表達(dá)增加,且該變化可能與Thpok有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：VIP T淋巴細(xì)胞 細(xì)胞分化 Thpok Runx3 GATA3
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文縮略表10-11
• 第1章 引言11-15
• 第2章 材料與方法15-29
• 2.1 細(xì)胞來源15
• 2.2 主要試劑15-16
• 2.3 主要液體配制16-17
• 2.4 主要儀器設(shè)備17-18
• 2.5 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖及分組18-19
• 2.5.1 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖18
• 2.5.2 實(shí)驗(yàn)分組18-19
• 2.6 實(shí)驗(yàn)方法19-21
• 2.6.1 細(xì)胞培養(yǎng)（jurkat淋巴細(xì)胞株、mol-4淋巴細(xì)胞株）19
• 2.6.2 檢測jurkat細(xì)胞VIP受體表達(dá)情況19-20
• 2.6.3 檢測jurkat細(xì)胞株與molt-4細(xì)胞株CD4/CD8及轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)情況20
• 2.6.4 確定VIP作用于jurkat細(xì)胞的最佳濃度20
• 2.6.5 藥物干預(yù)實(shí)驗(yàn)20-21
• 2.7 具體實(shí)驗(yàn)步驟21-28
• 2.7.1 免疫細(xì)胞化學(xué)21-22
• 2.7.2 熒光定量PCR22-25
• 2.7.3 Westorn-blot（免疫印跡法）25-27
• 2.7.4 流式細(xì)胞術(shù)27-28
• 2.8 統(tǒng)計(jì)分析28-29
• 第3章 結(jié)果29-34
• 3.1 jurkat細(xì)胞VIP受體的表達(dá)情況29
• 3.2.jurkat細(xì)胞株及molt-4細(xì)胞株CD4/CD8與各轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)情況29-30
• 3.3 VIP最佳作用濃度及活化條件確定30-31
• 3.4 不同實(shí)驗(yàn)組CD4/CD8表型變化31-33
• 3.5 不同實(shí)驗(yàn)組間Thpok、GATA3、Runx3的表達(dá)變化33-34
• 第4章 討論34-38
• 第5章 結(jié)論38-39
• 致謝39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果44-45
• 綜述45-51
• References49-51

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