發(fā)布時(shí)間：2021-10-30 22:39

　　結(jié)核病是一種古老的疾病,嚴(yán)重威脅著人類的健康。結(jié)核病曾在世界上廣泛流行,奪去無數(shù)人的生命,現(xiàn)在每年仍有上百萬人感染結(jié)核分枝桿菌。結(jié)核病已經(jīng)成為僅次于艾滋病的全球第二大傳染病。但是隨著抗生素的廣泛使用,甚至濫用,使細(xì)菌的耐藥問題越來越嚴(yán)重。結(jié)核分枝桿菌在長(zhǎng)期的進(jìn)化過程中,形成了多種對(duì)抗環(huán)境壓力的系統(tǒng)。近年來隨著多耐藥結(jié)核菌（multidrug-resistant TB,MDR-TB）和廣泛耐藥結(jié)核菌（extensively drug resistant TB,XDR-TB）的出現(xiàn),以及與HIV的共感染,使得并不樂觀的結(jié)核病疫情更加嚴(yán)重。與其他致病菌相比,結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁的特殊結(jié)構(gòu)使其對(duì)多種藥物具有天然抗性。結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁富含脂類,內(nèi)層主要是分枝菌酸,外層主要是長(zhǎng)鏈的脂肪酸,所以結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁對(duì)多數(shù)親水的和疏水的抗生素是不通透的。脂類合成缺陷會(huì)影響結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁的完整性,增加結(jié)核分枝桿菌對(duì)多種抗結(jié)核藥物的敏感�？股啬退巻栴}已經(jīng)對(duì)全球公共衛(wèi)生造成極大的威脅。從新的角度研究抗生素的作用機(jī)制將會(huì)為更好的控制藥物耐受提供更好的策略。目前,新型抗生素的開發(fā)極其緩慢,以耐藥基因作為靶點(diǎn)... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：113 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1 結(jié)核菌耐藥形勢(shì)
    2 結(jié)核菌耐藥機(jī)理
        2.1 結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁
        2.2 外排泵
        2.3 靶位突變
        2.4 CRISPR-Cas系統(tǒng)
        2.5 代謝相關(guān)基因
    3 新型抗菌方法
        3.1 新型抗生素或抑制劑
        3.2 金屬離子與抗生素
        3.3 小分子與抗生素
        3.4 噬菌體與抗生素
        3.5 抗體與抗生素
    4 結(jié)核分枝桿菌蛋白質(zhì)降解
    5 氟喹諾酮類藥物
    參考文獻(xiàn)
第2章 緒論
    1 選題依據(jù)、研究目的與意義
    2 科學(xué)問題
    3 研究?jī)?nèi)容與技術(shù)路線
第3章 結(jié)核分枝桿菌蛋白酶體附屬因子pafC在氟喹諾酮類藥物抗性中的作用與機(jī)理
    1 引言
    2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 質(zhì)粒、菌株及引物
        2.2 培養(yǎng)基
        2.3 主要試劑
        2.4 主要溶液配置
        2.5 主要儀器
    3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 細(xì)菌培養(yǎng)
        3.2 重組質(zhì)粒pALACE-pafC構(gòu)建
        3.3 回補(bǔ)菌株M371-pALACE-pafC構(gòu)建
        3.4 生長(zhǎng)曲線測(cè)定
        3.5 MIC測(cè)定
        3.6 抗生素殺菌動(dòng)力曲線
    4 結(jié)果與分析
        4.1 M371與野生型恥垢分枝桿菌生長(zhǎng)曲線的比較
        4.2 M371轉(zhuǎn)座子插入位點(diǎn)及同源基因分析
        4.3 基因pafC的失活增加細(xì)菌對(duì)氟喹諾酮類藥物的敏感性
        4.4 M371與野生型菌株在氟喹諾酮類藥物處理下的存活率
        4.5 M371與野生型對(duì)H_2O_2的脅迫應(yīng)答
        4.6 硫脲和2’2-聯(lián)吡啶對(duì)莫西沙星殺菌作用的影響
        4.7 M371與野生型菌株在酸性的亞硝酸鈉處理下的存活率
    5 討論
    參考文獻(xiàn)
第4章 結(jié)核分枝桿菌IclR家族轉(zhuǎn)錄因子Rv2989在異煙肼脅迫應(yīng)答中的作用及機(jī)理研究
    1 引言
    2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 質(zhì)粒、菌株及引物
        2.2 培養(yǎng)基
        2.3 試劑
    3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 細(xì)菌培養(yǎng)
        3.2 無標(biāo)記MSMEG_2386敲除菌株的構(gòu)建與鑒定
        3.3 異煙肼脅迫下的生長(zhǎng)曲線測(cè)定
        3.4 MIC測(cè)定
        3.5 RNA的提取與qRT-PCR
        3.6 蛋白濃度測(cè)定
        3.7 全細(xì)胞裂解液中過氧化氫酶活性測(cè)定
        3.8 細(xì)菌在巨噬細(xì)胞中的存活率測(cè)定方法
    4 結(jié)果與分析
        4.1 IclR家族蛋白R(shí)v2989保守性分析
        4.2 恥垢分枝桿菌MSMEG_2386敲除菌構(gòu)建
        4.3 恥垢分枝桿菌MSMEG_2386敲除菌株增加異煙肼的敏感性
        4.4 恥垢分枝桿菌MSMEG_2386敲除菌株不能改變乙硫異煙胺的敏感性
        4.5 恥垢分枝桿菌MSMEG_2386敲除導(dǎo)致katG和fur基因轉(zhuǎn)錄水平升高
        4.6 恥垢分枝桿菌MSMEG_2386敲除導(dǎo)致過氧化氫酶活性升高
        4.7 恥垢分枝桿菌MSMEG_2386敲除降低了恥垢分枝桿菌在巨噬細(xì)胞中的存活率
    5 討論
    參考文獻(xiàn)
第5章 分枝桿菌噬菌體SWU1gp39的功能研究
    1 引言
    2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 質(zhì)粒、菌株及引物
        2.2 培養(yǎng)基
        2.3 試劑
    3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 細(xì)菌培養(yǎng)
        3.2 Western Blotting
        3.3 潮霉素B脅迫下的生長(zhǎng)曲線測(cè)定
        3.4 MIC測(cè)定
        3.5 抗生素殺菌動(dòng)力曲線
        3.6 環(huán)境壓力脅迫實(shí)驗(yàn)
        3.7 RNA-seq
        3.8 脂肪酸提取及氣相色譜分析
        3.9 掃描電鏡
        3.10 透射電鏡
        3.11 抗酸染色
        3.12 細(xì)胞壁通透性檢測(cè)
        3.13 活性氧水平檢測(cè)
    4 結(jié)果與分析
        4.1 分枝桿菌噬菌體SWU1基因gp39的基本特性
        4.2 SWU1gp39及同源基因成功表達(dá)于模式菌株恥垢分枝桿菌
        4.3 重組菌株WT-pAL-gp39在潮霉素B脅迫下的生長(zhǎng)曲線
        4.4 重組菌株WT-pAL-gp39在抗生素壓力下的存活率
        4.5 重組菌株WT-pAL-gp39在環(huán)境壓力下的存活率
        4.6 Gp39調(diào)節(jié)恥垢分枝桿菌基因的轉(zhuǎn)錄
        4.7 Gp39的表達(dá)改變了恥垢分枝桿菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)
        4.8 Gp39的表達(dá)改變了恥垢分枝桿菌細(xì)胞壁的通透性
    5 討論
    參考文獻(xiàn)
第6章 氟喹諾酮類藥物深層次作用機(jī)制研究
    1 引言
    2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1 實(shí)驗(yàn)質(zhì)粒、菌種
        2.2 主要實(shí)驗(yàn)材料
    3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.1 菌株的培養(yǎng)
        3.2 MIC測(cè)定
        3.3 殺菌曲線測(cè)定
    4 結(jié)果與分析
        4.1 氟喹諾酮類藥物殺菌活性
        4.2 抗氧化劑對(duì)氟喹諾酮類藥物殺菌作用的影響
        4.3 過氧化氫酶KatG和KatE對(duì)莫西沙星殺菌作用的影響
        4.4 DNA雙鏈修復(fù)系統(tǒng)在莫西沙星殺菌中的作用
        4.5 DNA單鏈修復(fù)系統(tǒng)在莫西沙星殺菌中的作用
    5 討論
    參考文獻(xiàn)
附錄
創(chuàng)新點(diǎn)與展望
致謝
在學(xué)期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
碩士論文
[1]結(jié)核分枝桿菌噬菌體SWU1多糖解聚酶基因A321gp39的克隆表達(dá)及其功能的研究[D]. 嚴(yán)建龍.西南大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3467552