目的:利用釀酒酵母表面展示技術(shù)篩選幽門螺桿菌候選疫苗,并分析其免疫原性。方法:以幽門螺桿菌的空泡型細(xì)胞毒素A（vac A）基因作為研究對(duì)象,構(gòu)建重組S.cerevisiae EBY100/pYD1-VacA,通過Western blot、免疫熒光標(biāo)記和流式細(xì)胞儀對(duì)S.cerevisiae EBY100/pYD1-VacA進(jìn)行體外表達(dá)分析。以PBS和S.cerevisiae EBY100/pYD1為對(duì)照組,S.cerevisiae EBY100/pYD1-VacA為實(shí)驗(yàn)組,口服免疫SPF級(jí)BALB/c小鼠。通過ELISA分析檢測口服免疫后小鼠抗VacA特異性IgG及分泌型IgA效價(jià)。結(jié)果:VacA抗原蛋白被成功地展示在S.cerevisiae EBY100表面。小鼠經(jīng)口服免疫S.cerevisiae EBY100/p YD1-VacA后可誘導(dǎo)產(chǎn)生較高的VacA特異性抗體。結(jié)論:表面展示型釀酒酵母可以作為幽門螺桿菌候選疫苗的遞送載體,與此同時(shí),這也為開發(fā)其他細(xì)菌或病毒疫苗提供新思路。 

【文章來源】：中國生物工程雜志. 2020,40(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

免疫熒光分析

以Hp SS1基因組DNA作為模板，用vacA特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增并進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，所得結(jié)果如圖1所示。擴(kuò)增產(chǎn)物條帶長度約為762bp，與預(yù)期結(jié)果一致，表明vacA基因已擴(kuò)增成功。2.2 重組表達(dá)質(zhì)粒p YD1-VacA雙酶切鑒定

vac A基因與pYD1質(zhì)粒連接并轉(zhuǎn)化到E.coli DH5α感受態(tài)細(xì)胞中，篩選獲得陽性克隆E.coli DH5α/p YD1-Vac A。提取重組質(zhì)粒p YD1-VacA并進(jìn)行雙酶切鑒定。結(jié)果如圖2所示。圖中出現(xiàn)兩條帶，而且與質(zhì)粒和vac A基因大小(約762bp)相符。2.3 S.cerevisiae EBY100/p YD1-VacA的PCR鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3455806