目的:通過免疫熒光技術(shù)應(yīng)用共聚焦顯微鏡觀察納爾遜海灣病毒（NBV）感染的細(xì)胞中μN(yùn)S蛋白的定位情況。通過免疫熒光技術(shù)應(yīng)用共聚焦顯微鏡觀察單獨(dú)轉(zhuǎn)染M3質(zhì)粒的細(xì)胞中μN(yùn)S蛋白的形成包涵體的情況。利用質(zhì)譜分析技術(shù)對人致病性呼腸孤病毒μN(yùn)S蛋白的宿主互作蛋白進(jìn)行篩選及分析鑒定,明確未知蛋白的氨基酸序列及結(jié)構(gòu),推斷其在病毒感染復(fù)制過程中的作用,為深入研究納爾遜海灣病毒及正呼腸孤病毒對人類致病機(jī)制提供理論依據(jù)。方法:本研究通過免疫熒光方法在共聚焦顯微鏡下觀察了μN(yùn)S蛋白在NBV感染的細(xì)胞中的定位。為了確定μN(yùn)S蛋白在病毒包涵體樣結(jié)構(gòu)中定位,本研究將人致病性呼腸孤病毒以0.1PFU/細(xì)胞的感染復(fù)數(shù)（MOI）感染了L929細(xì)胞,孵育24小時,先后用μN(yùn)S多克隆抗體和Alexa 488的羊抗兔抗體對μN(yùn)S蛋白進(jìn)行免疫染色,免疫染色后用共聚焦顯微鏡觀察。為了證明當(dāng)在沒有其他NBV病毒蛋白表達(dá)的情況下,μN(yùn)S可以形成病毒包涵體樣結(jié)構(gòu),本研究用pEFHAMBM3質(zhì)粒（含有來自NBV病毒的M3基因的表達(dá)載體）轉(zhuǎn)染L929細(xì)胞,通過免疫熒光的方法在共聚焦顯微鏡下觀察μN(yùn)S在細(xì)胞中的分布。為了得到人致病性呼腸孤病毒... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

westernblot檢測M3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染M:Marker;1：10μL對照組蛋白樣本；2:20μL對照組蛋白樣本；3:10μL實(shí)驗(yàn)組樣本；

AMB感染L929細(xì)胞形成包涵體結(jié)構(gòu)

11圖 2B M3 轉(zhuǎn)染的 L929 細(xì)胞中 MB μN(yùn)S 的表達(dá)檢測免疫沉淀后μN(yùn)S 的表達(dá)及其互作蛋染后所得蛋白樣本進(jìn)行免疫沉淀，用含有 HA 抗蛋白，同時和μN(yùn)S 互作的蛋白也應(yīng)該同時被沉結(jié)果，HA 抗體磁珠加入前取 20μL 進(jìn)行蛋白印μN(yùn)S 表達(dá)。結(jié)果顯示可見μN(yùn)S 有表達(dá)（見圖 3可以通過銀染來確定。


本文編號：3456734