背景Sirtuins家族是賴NAD+依組蛋白去乙�；讣易宓牡冖箢惾ヒ阴；�,在細(xì)胞活動的很多方面都有重要的作用。去乙�；�3（SIRT3）是主要的線粒體內(nèi)的去乙�；�,去乙酰化酶能使許多氧化通路活化,從而在細(xì)胞的主要代謝中發(fā)揮作用。SIRT3能夠參與線粒體蛋白的表達(dá)與激活,降低氧化應(yīng)激作用產(chǎn)生的ROS水平,其缺失會導(dǎo)致代謝異常,并引起氧化應(yīng)激反應(yīng)和一系列與衰老相關(guān)的病理癥狀。這可能為臨床上相關(guān)疾病的研究提供重要靶點。在實驗中當(dāng)老鼠血液干細(xì)胞灌輸SIRT3,將再生形成新的血液細(xì)胞,呈現(xiàn)細(xì)胞功能性衰老退化的逆轉(zhuǎn)現(xiàn)象。紅鰭東方鲀是具有最小基因組大小的脊椎動物,但基因數(shù)目卻與人相近,外顯子/內(nèi)含子、啟動子等調(diào)控區(qū)域也是非常保守,也是常用的模式生物之一。因此,在本研究我們擬獲得SIRT3的重組蛋白,為進(jìn)一步在動物試驗中研究代謝性相關(guān)疾病及抗衰老等功能研究提供可靠的基礎(chǔ)材料。目的獲得紅鰭東方鲀SIRT3基因的序列,并與哺乳動物的SIRT3進(jìn)行生物信息學(xué)分析。構(gòu)建了SIRT3基因的原核表達(dá)載體并進(jìn)行蛋白的表達(dá)及純化,為進(jìn)一步在活體上研究SIRT3抗衰老等功能奠定基礎(chǔ)。方法1.采集紅鰭東方鲀肝臟組織... 

【文章來源】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院河南省

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

紅鰭東方鲀SIRT3基因RT-PCR擴增電泳圖譜

19一致的、高保守度的和低保守度的氨基酸序列分別用“*”“:”“.”標(biāo)出；KIV、GIP基序用方框標(biāo)明圖2 紅鰭東方鲀與其他物種SIRT3的氨基酸比對表 1 紅鰭東方鲀與其他物種 SIRT3 的同源性物種 同源性% 氨基酸序列號大黃魚(Larimichthys crocea) 78.3 XP_010752299.1尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus) 76.5 XP_005470975.1梭子魚 (Esox lucius) 73.8 XP_010888638.1半滑舌鰨 (Cynoglossus semilaevis) 69.5 XP_008310223

及人的同源性分別為78.3%、76.5%、73.8%、69.5%、55.1%、55.1%、49.5%、49.4%、48.0%、47.1%及46.6%（表1）。利用Mega5.0構(gòu)建NJ系統(tǒng)進(jìn)化樹（圖3）發(fā)現(xiàn)：分子進(jìn)化利分為兩支，一支為魚類的，另一支為非洲爪蟾和哺乳動物類。魚類這支首先紅鰭東方鲀SIRT3與大黃魚及梭子魚聚為一小支然后再與半滑舌鰨及尼羅羅非魚構(gòu)成一分支。故紅鰭東方鲀SIRT3與大黃魚、梭子魚的親緣性最為親密，與哺乳動物及非洲爪蟾的親緣性較為疏遠(yuǎn)。圖3 紅鰭東方鲀SIRT3與其他生物的系統(tǒng)進(jìn)化樹2.1.3 紅鰭東方鲀SIRT3蛋白的親/疏水性分析圖4 紅鰭東方鲀SIRT3基因編碼蛋白的親/疏水性分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]河豚魚肝腎蛋白組技術(shù)體系的建立及蛋白表達(dá)譜初步分析[D]. 鄭建洲.江蘇大學(xué) 2010



本文編號：3455739