本文關(guān)鍵詞：輪狀病毒單克隆抗體的制備，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：輪狀病毒是引發(fā)全世界兒童嚴(yán)重腹瀉的重要因素,該病毒引發(fā)的感染不僅嚴(yán)重影響嬰幼兒的健康及生存質(zhì)量,還給家庭及社會帶來巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),由此可見,輪狀病毒感染已經(jīng)在世界范圍內(nèi)成為一項(xiàng)亟待解決的重要公共衛(wèi)生問題。目前尚沒有治療輪狀病毒感染的特效藥,因此,研究一種快速并準(zhǔn)確的輪狀病毒早期檢測方法,對于該病毒的防治具有深遠(yuǎn)的意義。單克隆抗體具有特異性強(qiáng),靈敏度高的特點(diǎn),如果將其應(yīng)用于輪狀病毒檢測方法,則可對輪狀病毒感染患者進(jìn)行及時的診斷。本課題致力于制備抗輪狀病毒的單克隆抗體,為建立一種高效的輪狀病毒診斷檢測方法提供基本依據(jù)。論文的第一章介紹了與輪狀病毒相關(guān)的基礎(chǔ)知識,包括病毒的形狀及生物學(xué)特性,還綜述了近年來輪狀病毒的常見檢測手段,并且根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)工作經(jīng)驗(yàn)總結(jié)陳述了單克隆抗體制備過程中的影響因素。由于單克隆抗體的制備實(shí)驗(yàn)周期較長,實(shí)驗(yàn)步驟較多,一旦出現(xiàn)問題,會直接影響最終的結(jié)果,因此這一部分還列舉了實(shí)驗(yàn)各個環(huán)節(jié)的注意事項(xiàng),以避免相關(guān)人員在研究過程中出現(xiàn)較多問題。論文第二章通過考察各個環(huán)節(jié)的實(shí)驗(yàn)條件,包括抗原、血清的稀釋倍數(shù),封閉液的選擇、封閉條件的確定,酶標(biāo)二抗的包被時間以及底物液的顯色時間。建立了一種針對輪狀病毒蛋白質(zhì)的ELISA檢測方法,便于在單克隆抗體的制備過程中進(jìn)行相關(guān)抗體的檢測。論文第三章介紹了通過細(xì)胞融合獲得單克隆雜交瘤細(xì)胞的過程,包括小鼠的免疫、細(xì)胞融合、陽性雜交瘤的篩選和培養(yǎng)以及單克隆雜交瘤的獲得。本課題最終得到了五株能夠穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株:1B3-A2、1B3-C3、2B4-A9、3D19-C2、4E22-B10。論文第四章研究了大量制備單克隆抗體后,對該抗體進(jìn)行純化,并且進(jìn)一步考察了抗體純化后濃度、特異性以及生物學(xué)特性。通過單克隆抗體疊加實(shí)驗(yàn),可得出除1B3-A2和4E22-B10兩株單克隆雜交瘤細(xì)胞分泌的抗體有可能針對相同的抗原表位,1B3-C3、2B4-A9、3D19-C2等單克隆抗體均可能針對不同的抗原表位。
【關(guān)鍵詞】：輪狀病毒 單克隆抗體 細(xì)胞融合 雜交瘤
【學(xué)位授予單位】：青島科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-9
• 前言9-11
• 第1章 文獻(xiàn)綜述11-30
• 1.1 輪狀病毒概述11-17
• 1.1.1 輪狀病毒的外形特征11-12
• 1.1.2 輪狀病毒主要抗原的生物學(xué)特性12-15
• 1.1.3 致病機(jī)制15-16
• 1.1.4 輪狀病毒的流行病學(xué)特點(diǎn)16-17
• 1.2 輪狀病毒檢測方法的研究進(jìn)展17-20
• 1.2.1 經(jīng)典檢測技術(shù)17-18
• 1.2.2 免疫檢測技術(shù)18-19
• 1.2.3 基因檢測技術(shù)19-20
• 1.3 單克隆抗體概述20-28
• 1.3.1 抗體的結(jié)構(gòu)及其性質(zhì)20-21
• 1.3.2 單克隆抗體制備的影響因素21-28
• 1.4 本課題的研究目的和意義28-30
• 第2章 ELISA檢測方法的建立30-41
• 2.1 儀器與試劑30-32
• 2.1.1 主要試劑30-31
• 2.1.2 主要儀器31
• 2.1.3 主要溶液的配制31-32
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法32-34
• 2.2.1 陽性血清與陰性血清的制備32
• 2.2.2 抗原包被最佳濃度與對照血清最佳稀釋度的確定32-33
• 2.2.3 最佳封閉條件確定33-34
• 2.2.4 酶標(biāo)二抗最佳作用時間的確定34
• 2.2.5 底物液最佳作用時間的確定34
• 2.3 結(jié)果與討論34-39
• 2.3.1 最佳抗原及抗體工作濃度的確定34-35
• 2.3.2 最佳封閉條件的確定35-37
• 2.3.3 酶標(biāo)二抗最佳作用時間的確定37-38
• 2.3.4 底物液最佳作用時間的確定38-39
• 2.4 本章小結(jié)39-41
• 第3章 單克隆雜交瘤的制備41-60
• 3.1 材料儀器與試劑41-44
• 3.1.1 主要試劑41-42
• 3.1.2 主要儀器42
• 3.1.3 主要溶液的配制42-44
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法44-52
• 3.2.1 BALB/C小鼠的免疫44-46
• 3.2.2 ELISA測定小鼠血清效價46
• 3.2.3 蛋白免疫印跡法（Western-blot）檢測抗血清特異性46-48
• 3.2.4 細(xì)胞融合48-50
• 3.2.5 雜交瘤細(xì)胞株的建立和篩選50
• 3.2.6 雜交瘤細(xì)胞的單克隆及擴(kuò)大培養(yǎng)50-51
• 3.2.7 陽性雜交瘤細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇51
• 3.2.8 單克隆雜交瘤細(xì)胞的定性檢測51-52
• 3.3 結(jié)果與討論52-59
• 3.3.1 小鼠的免疫52-54
• 3.3.2 細(xì)胞融合54-55
• 3.3.3 陽性雜交瘤的篩選與單克隆雜交瘤細(xì)胞株的建立55-57
• 3.3.4 單克隆雜交瘤細(xì)胞的定性檢測57-59
• 3.4 本章小結(jié)59-60
• 第4章 單克隆抗體的制備純化及鑒定60-72
• 4.1 儀器與試劑60-62
• 4.1.1 主要試劑60-61
• 4.1.2 主要儀器61
• 4.1.3 主要溶液的配制61-62
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法62-66
• 4.2.1 單克隆抗體亞型的鑒定62-63
• 4.2.2 抗體的制備和純化63-64
• 4.2.3 抗體效價的測定64
• 4.2.4 SDS-PAGE分析抗體純度64
• 4.2.5 抗體濃度的測定64
• 4.2.6 單克隆雜交瘤細(xì)胞分泌抗體穩(wěn)定性鑒定64-65
• 4.2.7 單克隆抗體特異性分析65-66
• 4.3 結(jié)果與討論66-71
• 4.3.1 單克隆抗體亞型的鑒定66-67
• 4.3.2 抗體效價的測定67
• 4.3.3 抗體的鑒定67-68
• 4.3.4 抗體濃度的測定68-69
• 4.3.5 單克隆雜交瘤細(xì)胞分泌抗體穩(wěn)定性鑒定69
• 4.3.6 單克隆抗體特異性分析69-71
• 4.4 本章小結(jié)71-72
• 結(jié)論72-74
• 參考文獻(xiàn)74-78
• 附錄78-80
• 致謝80-81
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文81-82

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉澤濱;王瓊;胡琴;陸學(xué)東;;ELISA法、熒光免疫法及PCR檢測嬰幼兒腹瀉常見病毒[J];中國熱帶醫(yī)學(xué);2015年05期

2 徐�，�;蔡潔行;張玉彬;;生產(chǎn)用重組哺乳動物細(xì)胞株的克隆篩選方法[J];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報;2015年05期

3 唐亞華;黃紅林;;單克隆抗體的研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)世界;2015年03期

4 張蕾;馬凡舒;閆喜軍;徐淑娟;;單克隆抗體制備的關(guān)鍵因素[J];特產(chǎn)研究;2015年01期

5 曾華書;周海濤;侯紅斌;陳潤莉;賴植發(fā);張勇;;2013年深圳市兒童病毒性腹瀉中主要病毒的檢測與研究[J];中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2015年03期

6 錢錦;;細(xì)胞支原體污染清除方法比較及清除后的應(yīng)用[J];中國醫(yī)藥指南;2014年30期

7 潘艷;張昕;;單克隆抗體技術(shù)的研究進(jìn)展[J];吉林工商學(xué)院學(xué)報;2014年05期

8 李瑛;;小兒輪狀病毒腸炎流行病學(xué)特點(diǎn)及醫(yī)院感染控制[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2014年08期

9 李愛萍;陳敏娟;王稀琛;金可心;張紅;周建偉;;小鼠腹水JWA單克隆抗體的制備鑒定[J];藥物生物技術(shù);2014年02期

10 羅明;龔成;史玲莉;吳疆;張合潤;王玉梅;高志勇;黃芳;;五種常用輪狀病毒檢測方法的評價及應(yīng)用策略[J];疾病監(jiān)測;2014年03期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 薛斌;氯和二氧化氯對人輪狀病毒的消毒規(guī)律及基因組損傷作用研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2013年

2 孫鳳霞;三聚氰胺單克隆抗體制備及其高靈敏快速檢測技術(shù)研究[D];江南大學(xué);2011年

3 劉芳寧;益生菌對輪狀病毒感染和腹瀉的保護(hù)機(jī)制[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

4 鄭帥玉;輪狀病毒NSP4及其表位肽在膽管閉鎖鼠模型損傷中的作用及機(jī)理研究[D];華中科技大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 王彩宏;牛結(jié)合珠蛋白單克隆抗體的制備及初步應(yīng)用[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2015年

2 沈鵬;異常凝血酶DCP單克隆抗體的制備及鑒定[D];南京醫(yī)科大學(xué);2014年

3 胡婷婷;2011-2012年廣州市哨點(diǎn)醫(yī)院病毒性腹瀉的流行病學(xué)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

4 張U

本文編號：341527