本文關(guān)鍵詞：廣西巴馬長(zhǎng)壽地區(qū)不同年齡人群腸道菌群分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：人體腸道的微生態(tài)平衡是由腸道中巨大的微生物庫(kù)與人體之間構(gòu)成的,使得人體處在一個(gè)動(dòng)態(tài)平衡之中,從而保證機(jī)體正常的生理活動(dòng)。若這種平衡被破壞,菌群出現(xiàn)失調(diào),將會(huì)引發(fā)大量相關(guān)疾病。研究表明,在宿主與腸道微生物共同進(jìn)化的過(guò)程中,宿主內(nèi)在因素或外在環(huán)境因素共同影響著腸道菌群的定植能力及其組成的多樣性,從而影響腸道菌群的平衡。目前,腸道菌群與宿主年齡之間的關(guān)系尚不明確,但宿主的年齡又是影響長(zhǎng)壽家族腸道菌群結(jié)構(gòu)組成的一個(gè)主要因素。因此本研究征集了世界長(zhǎng)壽鄉(xiāng)廣西巴馬鎮(zhèn)不同年齡的健康人群共計(jì)28名志愿者,并應(yīng)用微生物純培養(yǎng)法、變性梯度凝膠電泳(Denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE)與實(shí)時(shí)熒光定量(Real time PCR, RT-PCR)相結(jié)合的方法來(lái)研究年齡因素對(duì)廣西巴馬志愿者腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響,為研究人類年齡與腸道菌群的相關(guān)性提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：1.從世界長(zhǎng)壽鄉(xiāng)廣西巴馬鎮(zhèn)所轄3個(gè)村采集長(zhǎng)壽家族人群的糞便樣品28份,利用選擇性培養(yǎng)基研究了糞便樣品中分離的乳酸菌數(shù)量,并通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)研究其耐酸耐膽鹽及抑菌能力；根據(jù)年齡將樣品分為4組,青少年組、中年組、老年組和長(zhǎng)壽組。結(jié)果表明,從28份樣品中共分離出1273株菌株,通過(guò)生理生化試驗(yàn)將1178株菌初步鑒定為乳酸菌;其中,青少年組糞便樣品中乳酸菌數(shù)量最多,為9.16±0.18 lgcfu/g,隨著年齡的增長(zhǎng),乳酸菌數(shù)量逐漸減少,中年組和老年組分別為8.93±0.35 lgcfu/g和8.67±0.351gcfu/g,但是長(zhǎng)壽組乳酸菌數(shù)量還是保持著一個(gè)較高的水平,為8.89±0.48 lgcfu/g;中年組與老年組糞便樣品中分離的乳酸菌在pH為3的人工胃液中的存活率相當(dāng),分別為40.85±3.27%和37.26±2.32%,顯著高于青少年組和長(zhǎng)壽組(P0.05),其中長(zhǎng)壽組腸道乳酸菌耐受胃液能力最差,為28.26±3.85%；不同年齡組的乳酸菌在含0.5%耐膽鹽和pH為6.8的人工腸液中的存活率無(wú)顯著性差異；青少年組和中年組分離的乳酸菌抑制大腸桿菌的能力顯著高于老年組和長(zhǎng)壽組(P0.05),抑菌圈直徑分別為18.67±0.98mm和17.98±0.71mm,而長(zhǎng)壽組分離的乳酸菌抑制金黃色葡萄球菌能力略低于青少年組和中年組,但顯著高于老年組,抑菌圈直徑為15.41±1.48mm。2.應(yīng)用PCR-DGGE技術(shù)研究了巴馬長(zhǎng)壽村不同年齡人群腸道菌群的差異。結(jié)果表明,青少年組、老年組和長(zhǎng)壽組各組間腸道中的優(yōu)勢(shì)菌群親緣性較低,主要差異性菌株是：普通擬桿菌、瘤胃球菌、青春雙歧桿菌、產(chǎn)黑色普雷沃菌、梭菌、不可培養(yǎng)細(xì)菌、鮑氏不動(dòng)桿菌、酸微菌屬、表皮葡萄球菌、干酪乳桿菌、挑剔真桿菌和福氏埃希桿菌,但是各年齡組內(nèi)的腸道中的優(yōu)勢(shì)菌群親緣性較高；青少年組和長(zhǎng)壽組組間腸道中的擬桿菌親緣性較高,中年組和老年組組間親緣性較高,青少年組和長(zhǎng)壽組與中年組和老年組之間親緣性較低,主要差異性菌株是：普通擬桿菌、類桿菌屬、不可培養(yǎng)菌、多形擬桿菌、吉氏擬桿菌、福賽斯坦納菌和脆弱擬桿菌,青少年組、中年組和長(zhǎng)壽組組內(nèi)腸道中的擬桿菌親緣性較高；青少年組和長(zhǎng)壽組組間腸道中的柔嫩梭菌親緣性較高,與中年組和老年組親緣性低,且中年組和老年組組間親緣性較低,主要差異菌株是：瘤胃菌屬、熱纖梭菌、解纖維素梭菌、梭狀芽胞桿菌、不可培養(yǎng)菌、巴斯德梭菌、化糖梭狀芽胞桿菌,青少年組和中年組組內(nèi)親緣性低,老年組和長(zhǎng)壽組組內(nèi)親緣性高；四個(gè)年齡組組間腸道中的雙歧桿菌親緣性都較高,主要差異菌株是：兩歧雙岐桿菌、嗜熱雙歧桿菌、長(zhǎng)雙歧桿菌、短雙歧桿菌、動(dòng)物雙歧桿菌、不可培養(yǎng)雙歧桿菌、齒雙歧桿菌和青春雙歧桿菌,四個(gè)年齡組組內(nèi)腸道中的雙歧桿菌親緣性都較高;青少年組和長(zhǎng)壽組組間腸道中的乳酸桿菌親緣性較高,與中年組和老年組親緣性低,且中年組和老年組組間親緣性較高,主要差異菌株是：瑞士乳桿菌、瘤胃乳桿菌、羅伊乳桿菌、格氏乳桿菌、鼠李糖桿菌、發(fā)酵乳桿菌、嗜酸乳桿菌、唾液乳桿菌、布赫內(nèi)氏乳桿菌、植物乳桿菌和約氏乳桿菌,四個(gè)年齡組組內(nèi)腸道中的乳酸桿菌親緣性都較高。3.應(yīng)用RT-PCR技術(shù)研究巴馬長(zhǎng)壽村不同年齡人群腸道菌群的差異。結(jié)果表明,中年組、長(zhǎng)壽組及老年組腸道中腸桿菌數(shù)量分別為8.16±0.291gcopies/g、7.93±0.57 lgcopies/g及7.89±0.421gcopies/g,其中中年組顯著高于青少年組的7.46±0.32 lgcopies/g(P0.05)；中年組和老年組腸道中的腸球菌的數(shù)量分別為7.06±0.44 lgcopies/g、7.89±0.331gcopies/g,均顯著高于青少年組的7.06±0.441gcopies/g和長(zhǎng)壽組的6.93±0.371gcopies/g(P0.05)；青少年組和中年組腸道中的柔嫩梭菌數(shù)量分別是9.06±0.441gcopies/g 8.91±0.171gcopies/g,均顯著高于老年組的8.42±0.231gcopies/g和長(zhǎng)壽組的8.13±0.261gcopies/g(P0.05)；長(zhǎng)壽組和青少年組腸道中的乳桿菌數(shù)量分別為8.63±0.381gcopies/g和8.36±0.481gcopies/g,其中長(zhǎng)壽組顯著高于中年組的7.85±0.211gcopies/g和老年組的7.98±0.221gcopies/g(P0.05)；青少年組和長(zhǎng)壽組腸道中的擬桿菌數(shù)量分別為9.76±0.351gcopies/g、9.53±0.281gcopies/g,其中青少年組顯著高于中年組的9.23±0.171gcopies/g及老年組的8.92±0.321gcopies/g(P0.05)；長(zhǎng)壽組和青少年組腸道中的雙歧桿菌數(shù)量分別為10.52±0.391gcopies/g、 10.05±0.46 lgcopies/g,均顯著高于中年組的8.86±0.411gcopies/g和老年組的8.33±0.92lgcopies/g(P0.05),且雙歧桿菌的數(shù)量略高于擬桿菌的數(shù)量,顯著高于其它4種優(yōu)勢(shì)菌屬(P0.05)。
【關(guān)鍵詞】：長(zhǎng)壽地區(qū) 年齡 腸道菌群
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R333
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-10
• 符號(hào)說(shuō)明10-11
• 1 緒論11-23
• 1.1 人體腸道菌群11-15
• 1.1.1 人體腸道菌群的結(jié)構(gòu)組成11-13
• 1.1.2 人體腸道菌群的主要功能13-14
• 1.1.3 人體腸道菌群與年齡關(guān)系的研究進(jìn)展14-15
• 1.2 腸道菌群的研究方法15-17
• 1.2.1 腸道乳酸菌的純培養(yǎng)法15
• 1.2.2 變性梯度凝膠電泳15-16
• 1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量16-17
• 1.2.4 其他研究腸道菌群的分子生物學(xué)技術(shù)17
• 1.3 研究目的、意義及主要內(nèi)容17-18
• 1.3.1 研究目的與意義17-18
• 1.3.2 主要研究?jī)?nèi)容18
• 1.4 參考文獻(xiàn)18-23
• 2 應(yīng)用純培養(yǎng)法研究分離自廣西巴馬不同年齡人群腸道的乳酸菌數(shù)量及其耐受性和抑菌能力23-35
• 2.1 材料和設(shè)備23
• 2.1.1 主要儀器和設(shè)備23
• 2.1.2 試劑與材料23
• 2.2 試驗(yàn)方法23-27
• 2.2.1 溶液及培養(yǎng)基的配制23-24
• 2.2.2 樣品采集及保存24
• 2.2.3 腸道乳酸菌的分離與計(jì)數(shù)24-25
• 2.2.4 腸道乳酸菌的初步鑒定25-26
• 2.2.5 腸道乳酸菌的保藏26
• 2.2.6 腸道乳酸菌耐膽鹽能力的測(cè)定26
• 2.2.7 腸道乳酸菌耐受人工胃液能力的測(cè)定26
• 2.2.8 腸道乳酸菌耐受人工腸液能力的測(cè)定26-27
• 2.2.9 腸道乳酸菌抑制致病菌能力的測(cè)定27
• 2.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理27
• 2.3 結(jié)果與分析27-32
• 2.3.1 樣品信息27-28
• 2.3.2 腸道乳酸菌的分離及初步鑒定28-30
• 2.3.3 分離的不同年齡人群腸道乳酸菌總數(shù)的比較30-31
• 2.3.4 分離的不同年齡人群的腸道乳酸菌的耐受能力的比較31
• 2.3.5 分離的不同年齡人群腸道乳酸菌對(duì)致病菌的抑制能力比較31-32
• 2.4 小結(jié)32-33
• 2.5 參考文獻(xiàn)33-35
• 3 應(yīng)用PCR-DGGE技術(shù)研究廣西巴馬不同年齡人群腸道菌群35-54
• 3.1 材料和設(shè)備35
• 3.1.1 主要儀器和設(shè)備35
• 3.1.2 試劑與材料35
• 3.2 試驗(yàn)方法35-41
• 3.2.1 常用溶液或試劑的配制35-36
• 3.2.2 糞便樣品的采集36
• 3.2.3 糞便樣品基因組DNA的提取36-37
• 3.2.4 糞便菌群組成的變性梯度凝膠電泳(DGGE)分析37-39
• 3.2.5 DGGE膠優(yōu)勢(shì)條帶的回收及克隆測(cè)序39-41
• 3.2.6 PCR-DGGE條帶分析41
• 3.3 結(jié)果與分析41-51
• 3.3.1 優(yōu)勢(shì)菌群DGGE結(jié)果分析41-43
• 3.3.2 擬桿菌DGGE結(jié)果分析43-45
• 3.3.3 柔嫩梭菌屬DGGE結(jié)果分析45-47
• 3.3.4 雙歧桿菌DGGE結(jié)果分析47-49
• 3.3.5 乳桿菌DGGE結(jié)果分析49-51
• 3.4 小結(jié)51-52
• 3.5 參考文獻(xiàn)52-54
• 4 應(yīng)用RT-PCR技術(shù)研究廣西巴馬不同年齡人群腸道菌群54-63
• 4.1 材料和設(shè)備54
• 4.1.1 主要儀器和設(shè)備54
• 4.1.2 試劑與材料54
• 4.2 試驗(yàn)方法54-57
• 4.2.1 糞便樣品的采集54
• 4.2.2 糞便樣品基因組DNA的提取54
• 4.2.3 引物的設(shè)計(jì)及合成54-55
• 4.2.4 常規(guī)PCR反應(yīng)55
• 4.2.5 RT-PCR反應(yīng)55-57
• 4.2.6 待測(cè)樣品的定量57
• 4.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理57
• 4.3 結(jié)果與分析57-60
• 4.3.1 人體腸道細(xì)菌RT-PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線57-59
• 4.3.2 不同年齡人群糞便細(xì)菌定量結(jié)果59-60
• 4.4 小結(jié)60-61
• 4.5 參考文獻(xiàn)61-63
• 5 結(jié)論63-64
• 6 致謝64-65
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄65-66

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本文編號(hào)：340840