發(fā)布時間：2021-09-25 16:47

　　實驗背景:人類自身免疫性疾病越來越普遍,一方面原因是由于在整個基因庫中保留了許多易感基因,另一方面原因是在過去一個世紀中出現(xiàn)了新的環(huán)境因素變化。這些疾病是由不受控制的自身反應性T細胞引起的,其存在于患者和許多無癥狀個體的外周血液循環(huán)中,可歸因于不完全的胸腺選擇過程。T細胞在胸腺發(fā)育期間獲得T細胞受體（TCR）,于皮質(zhì)中與自身MHC結(jié)合進行陽性選擇,而后于髓質(zhì)中與MHC/自身肽復合物結(jié)合進行陰性選擇,導致清除大多數(shù)自身反應性T細胞,其余成熟T細胞可以釋放到外周。我們對胸腺選擇機制的了解大多來自于動物模型。一些對人類在心臟手術期間被摘除的胸腺組織進行的研究,提供了關于人胸腺細胞表型和分布的一些信息,對其功能研究的見解有限。然而,除了血液樣本之外,人體免疫細胞和組織的縱向研究是不可行的,并且使用人胸腺組織來評估與其抗原特異性相關的胸腺細胞的發(fā)育和命運是具有挑戰(zhàn)性的�，F(xiàn)在有可能從單個人供體獲取胸腺組織和造血干細胞（HSC）,產(chǎn)生多個“相同”的人源化小鼠,這些小鼠允許縱向研究以及各種操作,例如將特定TCR和/或抗原引入造血干細胞中,這將在小鼠上重建人類免疫系統(tǒng)。這種體內(nèi)模型為研究人類自身反應性T... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：109 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

TCR與MHC-自身多肽復合物的親和力與T細胞最終命運關系

5圖 2 中樞選擇的細胞類型以及陽性選擇和克隆清除機制[Cold Spring Harb Perspect Biol. 2012, 4(6):997-1001.]1.2.2 胸腺內(nèi)的抗原呈遞細胞：髓質(zhì)胸腺上皮細胞（mTECs）髓質(zhì)胸腺上皮細胞在胸腺耐受中發(fā)揮至關重要的作用，由于它們表達大量組織特異性自身抗原（TSAs）,所以在胸腺抗原呈遞細胞中表現(xiàn)出獨特的特性[15] [16]。髓質(zhì)胸腺上皮細胞還表達一種稱為自身免疫調(diào)節(jié)因子（AIRE）的核內(nèi)調(diào)節(jié)蛋白，該基因的突變會導致多器官綜合征，如自身免疫性多發(fā)性內(nèi)分泌病-念珠菌病-外胚層營養(yǎng)不良綜

-黑素瘤細胞Mel-A375，并測試它們是否具有刺激MART1 TCR T細胞活化及殺傷腫瘤細胞的功能（圖2.1）。MART1A27L蛋白為含有MART1抗原肽的完整蛋白，該蛋白和Mart1抗原肽均能夠被腫瘤細胞加工并呈遞給MART1-TCR特異性T細胞識別。識別活化的T細胞表現(xiàn)為TCR、GFP和Ki-67表達上調(diào)。本實驗選用了轉(zhuǎn)導MART1多肽建立模型。編碼MART1-TCR和MART1肽的慢病毒載體（圖2.2D）用于轉(zhuǎn)導造血干細胞，其轉(zhuǎn)導效率高達90%以上（圖2.2E）。實驗組及對照組人源化小鼠的構(gòu)建策略（圖2.2F）所示。MART1抗原肽實驗組小鼠尾靜脈同時輸注1×105轉(zhuǎn)導MART1 TCR基因的造血干細胞和1×105轉(zhuǎn)導MART1抗原肽基因的造血干細胞。另一組為對照組小鼠將同時輸注1×105轉(zhuǎn)導Mart-1 TCR基因的造血干細胞和1×105轉(zhuǎn)導對照慢病毒的造血干細胞。隨時間評估外周血中T細胞，B細胞和CD11c+細胞的百分比以及MART1反應性T細胞（Tet+細胞）的百分比，各群細胞劃定方法如圖所示（圖2.3G）。由于人胸腺組織的移植不良而導致個別具有低嵌合狀態(tài)的小鼠被排除（圖2.3H）兩組中的小鼠在重建后8周顯示約有50％的人細胞重建（圖2.4A）。隨著胚胎胸腺移植物的生長，人T細胞在小鼠血液中的百分比隨時間推移逐漸增多（圖2.4B），導致人B細胞比例的相對降低（圖2.4C）。人CD11c+細胞的百分比在CD45+細胞中約為4％，隨時間推移保持穩(wěn)定（圖2.4D）。重要的是


本文編號：3410089