本文關(guān)鍵詞：鈣敏感受體在戊四氮點(diǎn)燃慢性癲癇大鼠模型心肌細(xì)胞中的表達(dá)及作用機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：癲癇是臨床上常見的慢性的神經(jīng)系統(tǒng)疾病,主要癥狀是反復(fù)突然發(fā)作意識喪失伴抽搐,嚴(yán)重可伴有腦水腫、心臟損害等全身各器官及系統(tǒng)及損傷。這是由于正常情況下腦通過自主神經(jīng)系統(tǒng)來調(diào)節(jié)心臟活動,神經(jīng)系統(tǒng)功能異常時(shí),腦對心臟的調(diào)節(jié)出現(xiàn)異常,引發(fā)心臟損害,這種情況在臨床上被稱作腦心綜合征(Brain-Heart Syndrome,BHS)。各種引起顱內(nèi)壓增高的疾病均可引起腦心綜合征改變(又稱腦源性心臟損害),常見的疾病有癲癇、急性顱腦損傷、急性腦血管病、顱內(nèi)炎癥、顱內(nèi)腫瘤及其它各種顱內(nèi)疾患。據(jù)目前統(tǒng)計(jì)所知,引發(fā)腦心綜合征的最常見病因之一是顳葉癲癇,在我國,癲癇發(fā)病人數(shù)每年約為人口的25.3/10萬,并且呈現(xiàn)上升趨勢,以世界性常見、多發(fā)癲癇病為例,其中多數(shù)病例可出現(xiàn)心率加快,甚至出現(xiàn)心臟驟停導(dǎo)致死亡[1,2]。因此,腦心綜合征的研究,對于臨床的治療具有重要意義。鈣敏感受體(CaSR)的發(fā)現(xiàn)使人們認(rèn)識到Ca2+同樣可以作為細(xì)胞外第一信使發(fā)揮類似激素的作用[3]。鈣敏感受體(calcium-sensing receptor,CaSR)是屬于G蛋白偶聯(lián)受體C家族成員,由Brown EM等人在1993年首先從牛甲狀旁腺克隆出來,隨后發(fā)現(xiàn)甲狀腺、腸道、腎臟、肝臟及中樞神經(jīng)等組織及器官中也有鈣敏感受體廣泛存在,2003年Wang等人首次在大鼠心肌組織中發(fā)現(xiàn)CaSR表達(dá)[4、5]。研究表明,CaSR可以識別細(xì)胞外Ca2+的細(xì)微變化,并保證時(shí)刻調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)鈣的穩(wěn)態(tài),同時(shí)在維持機(jī)體Ca2+穩(wěn)態(tài)和其它金屬離子穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮關(guān)鍵作用,并且參與調(diào)節(jié)激素分泌,細(xì)胞增殖、分化、凋亡、基因表達(dá),離子通道開放等過程[6]。2012年,郭津[7]人等證實(shí),CaSR參與了大鼠心肌缺血/再灌注損傷、心肌肥大的發(fā)生[8]。目前,癲癇大鼠心肌細(xì)胞中CaSR表達(dá)及其作用通路情況尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過觀察戊四氮誘導(dǎo)的慢性癲癇大鼠模型的心肌細(xì)胞中CaSR表達(dá),證明癲癇大鼠心肌細(xì)胞中有CaSR表達(dá)及其在細(xì)胞凋亡中與線粒體的關(guān)系。方法清潔級雄性Wistar大鼠,體重180±10克,哈爾濱醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)室提供。隨機(jī)分為正常組(control group,n=12),癲癇組(epilepsy group,n=12)。癲癇組采用連續(xù)28天腹腔注射亞驚厥劑量戊四氮生理鹽水注射液35mg/kg.d(pentetrazole PTZ),建立慢性癲癇大鼠模型。注射后觀察抽搐發(fā)作情況,記錄癲癇發(fā)作的級別、發(fā)作潛伏期(s)(即注入PTZ到首次癇性發(fā)作之間經(jīng)歷的時(shí)間)及發(fā)作持續(xù)時(shí)間(s),凡出現(xiàn)Ⅲ級以上癇性發(fā)作的大鼠為模型制備成功(癲癇大鼠行為分級按racine分級法)。腦電圖檢測大腦異常放電情況。心臟彩超檢測心率、左心室縮短分?jǐn)?shù)和左室射血分?jǐn)?shù)。采用德國臨床化學(xué)學(xué)會(dgkc)推薦法檢測血清肌酸激酶(ck)、血清肌酸激酶同工酶(ck-mb)。he染色觀察心肌形態(tài)學(xué)變化;電鏡觀察心臟超微結(jié)構(gòu)變化。westernbloting分別觀察心肌casr、bcl-2、caspase3和bax的蛋白表達(dá)情況。結(jié)果腦電檢查正常組未見異常變化,癲癇組腦電圖可見明顯節(jié)律失調(diào),可見尖波及棘波改變,提示癲癇組造模成功。經(jīng)胸高頻超聲心動圖能清晰顯示大鼠的左室長軸切面,正常組心率348次/分,m型曲線顯示左室壁節(jié)律規(guī)整,癲癇組大鼠心率461次/分,m型曲線顯示左室壁節(jié)律失調(diào)。左心室縮短分?jǐn)?shù)(fs)正常值35%-84%,正常組及癲癇組處于正常范圍之內(nèi);左心室射血分?jǐn)?shù)(ef)正常值55%-65%,正常組結(jié)果處于正常范圍,癲癇組ef值降低。血清酶結(jié)果顯示,癲癇組ck、ck-mb檢測結(jié)果高于正常組(p0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。大鼠心肌細(xì)胞在光鏡下觀察:正常組細(xì)胞排列整齊,細(xì)胞核及橫紋清楚;癲癇組見細(xì)胞排列紊亂,橫紋不清,并見肌節(jié)的攣縮,部分細(xì)胞胞漿溶解消失,可見液化性壞死,部分細(xì)胞心肌纖維溶解,出現(xiàn)凝固性帶狀壞死,部分細(xì)胞核碎裂消失。在透射電鏡下見正常組心肌細(xì)胞的肌絲排列規(guī)則,橫紋清晰,細(xì)胞核完整,線粒體豐富且嵴密集。癲癇組肌節(jié)結(jié)構(gòu)紊亂,橫紋模糊,線粒體嵴部分呈溶解狀態(tài),細(xì)胞核固縮,染色質(zhì)邊集化。證明癲癇組大鼠心肌細(xì)胞出現(xiàn)壞死及凋亡,線粒體部分損傷明顯。westernbloting方法檢測casr、bax、bcl-2和caspase-3蛋白表達(dá)癲癇組心肌中casr表達(dá)高于正常組(p0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。癲癇組的bcl-2蛋白表達(dá)低于正常組(p0.05)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。癲癇組caspase-3的蛋白表達(dá)明顯高于正常組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。癲癇組bax的蛋白表達(dá)明顯高于正常組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。討論本課題采用ptz點(diǎn)燃癲癇大鼠模型目前應(yīng)用最為廣泛,連續(xù)28天腹腔注射ptz后,癲癇組大鼠顯示連續(xù)出現(xiàn)Ⅲ級以上癲癇發(fā)作,同時(shí)觀察到腦電圖出現(xiàn)節(jié)律異常,并可見尖波及棘波的出現(xiàn),證明造模成功。癲癇組大鼠心臟彩超下見心率明顯增快,左室射血分?jǐn)?shù)降低,證明癲癇組出現(xiàn)心臟損害改變。血清酶檢測中ck及ck-mb是提示心肌損傷的早期標(biāo)志物,對心肌損傷具有高特異性及高靈敏性的特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)癲癇組ck及ck-mb結(jié)果較正常組明顯增高(p0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)合心肌組織鏡下觀察,見細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂,細(xì)胞腫脹,細(xì)胞核碎裂;電鏡下見橫紋模糊,線粒體嵴部分呈溶解狀態(tài),細(xì)胞核固縮,染色質(zhì)邊集化,充分證明癲癇組存在心肌損害及心肌細(xì)胞凋亡改變。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明,PTZ誘導(dǎo)癲癇可導(dǎo)致大鼠心肌損傷,心肌組織中CaSR表達(dá)增加,CaSR激活后并通過線粒體內(nèi)源性途徑,激活Cyt-C-Caspase3途徑參與細(xì)胞凋亡有關(guān),并且證明,CaSR激活可抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá),激活促凋亡Bax蛋白表達(dá),從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。CaSR的表達(dá)上調(diào)可增加心肌損傷的易感性,因此,下調(diào)CaSR的表達(dá),對于癲癇患者的心肌保護(hù),預(yù)防腦心綜合癥是進(jìn)一步研究的重點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：鈣敏感受體 癲癇 心肌 線粒體 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：佳木斯大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R742.1;R-332
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-11
• 前言11-13
• 文獻(xiàn)綜述13-23
• 材料與方法23-29
• 結(jié)果29-33
• 討論33-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-44
• 致謝44-45
• 英文縮寫45-46
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)成果46-47
• 附圖47-48

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 歐陽文;段開明;左新華;;利多卡因?qū)θ毖?復(fù)氧后肝細(xì)胞鈣超載和細(xì)胞凋亡的影響[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年04期

2 朱靜峰;黃冬;;氧自由基、鈣超載與心肌缺血再灌注損傷[J];云南醫(yī)藥;2007年01期

3 李紅霞,李春海;婦科腫瘤組織中細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)及其與mtDNA突變相關(guān)性的研究[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;2003年01期

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本文編號：339377