本文關(guān)鍵詞：蛋白激酶C在小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化中的作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景細(xì)胞的成骨分化是一個(gè)復(fù)雜的調(diào)控過程,涉及很多信號(hào)通路的參與。蛋白激酶C (protein kinase C, PKC)為細(xì)胞信號(hào)通路中一種重要的激酶,可調(diào)節(jié)細(xì)胞的代謝、生長(zhǎng)、增殖和分化等多個(gè)生理活動(dòng)。多項(xiàng)研究表明PKC與細(xì)胞的成骨分化過程密切相關(guān)。但其是否在小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs)的成骨分化過程中起作用以及起到什么作用,則很少有人研究。目的本研究旨在探討不同亞型的PKC分子在小鼠BMSCs成骨分化中所起的作用,以期可以為骨質(zhì)疏松癥、骨腫瘤及骨損傷等臨床疾病提供新的治療靶點(diǎn)。方法1. BMSCs的成骨誘導(dǎo)：將80-90%融合度的第3代BMSCs進(jìn)行鋪板,添加終濃度為100 nM的地塞米松、50μM的L-抗壞血酸和10 mM的β-磷酸甘油二鈉的成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行不同時(shí)間段的誘導(dǎo),使BMSCs在體外向成骨細(xì)胞分化；2. Western印跡檢測(cè)BMSCs成骨誘導(dǎo)中不同PKC亞型的活化情況并確定PKC阻斷劑GF109203X (GFX)的最適作用濃度；3.采用茜素紅染色、實(shí)時(shí)熒光定量PCR (quantitative real-time PCR, qPCR)及堿性磷酸酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)等多種手段檢測(cè)BMSCs的成骨分化情況,并借此確定那個(gè)(些)亞型的PKC分子參與了對(duì)BMSCs成骨分化的調(diào)節(jié)。結(jié)果1. Western跡結(jié)果顯示小鼠BMSCs成骨誘導(dǎo)過程中PKCβⅡ、PKCδ、PKCμ PKCζ/λ均有顯著的活化,而PKCα、PKCθ則沒有明顯的活化；2. Western印跡結(jié)果顯示PKC阻斷劑GFX的最適工作濃度為3μM,該濃度下的GFX可明顯阻斷BMSCs成骨誘導(dǎo)中PKCβ Ⅱ的活化；3.茜素紅染色、qPCR及堿性磷酸酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)均提示PKCβⅡ被阻斷后,小鼠BMSCs的成骨分化水平得到了顯著的增強(qiáng)。結(jié)論現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)條件下,我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PKCβ Ⅱ可能在小鼠BMSCs的成骨分化過程中起到了負(fù)調(diào)控的作用,對(duì)PKCβⅡ活性的特異性阻斷可望為骨質(zhì)疏松癥、骨腫瘤及骨折等臨床疾病提供新的治療靶點(diǎn)。其它PKC亞型如PKCδ、PKCμ和PKCζ/λ是否在小鼠BMSCs的成骨分化過程中發(fā)揮作用,我們可在實(shí)驗(yàn)室具備相應(yīng)條件時(shí)進(jìn)行更深入的研究。
【關(guān)鍵詞】：PKC 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 成骨分化 堿性磷酸酶
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-10
• 材料10-15
• 方法15-23
• 結(jié)果23-30
• 討論30-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-41
• 綜述41-52
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 附錄52-53
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況53-54
• 致謝54-55
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷55

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 劉斌鈺;李寧毅;樊功為;金曉明;陳立強(qiáng);;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)鑒定及向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化研究[J];齊魯醫(yī)學(xué)雜志;2007年03期

  本文關(guān)鍵詞：蛋白激酶C在小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：338885