本文關(guān)鍵詞：蛋白激酶C在小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化中的作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景細胞的成骨分化是一個復雜的調(diào)控過程,涉及很多信號通路的參與。蛋白激酶C (protein kinase C, PKC)為細胞信號通路中一種重要的激酶,可調(diào)節(jié)細胞的代謝、生長、增殖和分化等多個生理活動。多項研究表明PKC與細胞的成骨分化過程密切相關(guān)。但其是否在小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs)的成骨分化過程中起作用以及起到什么作用,則很少有人研究。目的本研究旨在探討不同亞型的PKC分子在小鼠BMSCs成骨分化中所起的作用,以期可以為骨質(zhì)疏松癥、骨腫瘤及骨損傷等臨床疾病提供新的治療靶點。方法1. BMSCs的成骨誘導：將80-90%融合度的第3代BMSCs進行鋪板,添加終濃度為100 nM的地塞米松、50μM的L-抗壞血酸和10 mM的β-磷酸甘油二鈉的成骨誘導培養(yǎng)基進行不同時間段的誘導,使BMSCs在體外向成骨細胞分化；2. Western印跡檢測BMSCs成骨誘導中不同PKC亞型的活化情況并確定PKC阻斷劑GF109203X (GFX)的最適作用濃度；3.采用茜素紅染色、實時熒光定量PCR (quantitative real-time PCR, qPCR)及堿性磷酸酶活性檢測實驗等多種手段檢測BMSCs的成骨分化情況,并借此確定那個(些)亞型的PKC分子參與了對BMSCs成骨分化的調(diào)節(jié)。結(jié)果1. Western跡結(jié)果顯示小鼠BMSCs成骨誘導過程中PKCβⅡ、PKCδ、PKCμ PKCζ/λ均有顯著的活化,而PKCα、PKCθ則沒有明顯的活化；2. Western印跡結(jié)果顯示PKC阻斷劑GFX的最適工作濃度為3μM,該濃度下的GFX可明顯阻斷BMSCs成骨誘導中PKCβ Ⅱ的活化；3.茜素紅染色、qPCR及堿性磷酸酶活性檢測實驗均提示PKCβⅡ被阻斷后,小鼠BMSCs的成骨分化水平得到了顯著的增強。結(jié)論現(xiàn)有實驗條件下,我們的實驗結(jié)果顯示PKCβ Ⅱ可能在小鼠BMSCs的成骨分化過程中起到了負調(diào)控的作用,對PKCβⅡ活性的特異性阻斷可望為骨質(zhì)疏松癥、骨腫瘤及骨折等臨床疾病提供新的治療靶點。其它PKC亞型如PKCδ、PKCμ和PKCζ/λ是否在小鼠BMSCs的成骨分化過程中發(fā)揮作用,我們可在實驗室具備相應(yīng)條件時進行更深入的研究。
【關(guān)鍵詞】：PKC 骨髓間充質(zhì)干細胞 成骨分化 堿性磷酸酶
【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-10
• 材料10-15
• 方法15-23
• 結(jié)果23-30
• 討論30-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻35-41
• 綜述41-52
• 參考文獻47-52
• 附錄52-53
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況53-54
• 致謝54-55
• 個人簡歷55

【參考文獻】

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1 劉斌鈺;李寧毅;樊功為;金曉明;陳立強;;大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)鑒定及向成骨細胞誘導分化研究[J];齊魯醫(yī)學雜志;2007年03期

  本文關(guān)鍵詞：蛋白激酶C在小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：338885