本文關鍵詞：小鼠幾種長鏈非編碼RNA基因功能的初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：越來越多的研究表明,基因突變或修飾是人類疾病的重要病因之一。最新的研究表明,人類基因組中約93%的序列可以被轉錄,轉錄組中98%基因序列的是不編碼蛋白質的非編碼RNA (noncoding RNA, ncRNA),而具有蛋白質編碼功能的轉錄序列不超過2%。非編碼RNA包括小ncRNAs和lnc RNAs(long non-coding RNAs).現(xiàn)有的研究表明lncRNAs在表觀遺傳,轉錄水平、轉錄后水平方面控制基因的表達和維持干細胞干性、信號轉導、細胞增殖和分化、代謝、個體發(fā)育等幾乎所有關鍵生命活動中發(fā)揮重要的調控作用,并且與人類多種重大疾病的發(fā)生密切相關,如癌癥發(fā)生、呼吸道疾病、心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病、病毒感染。但是,至今已知功能的lncRNA寥寥無幾,這就成為了ncRNA功能作用研究的重大障礙。本論文首先從NCBI中通過QPCR篩選在出生后小鼠骨骼肌中表達異常的相關2個基因,AK006720和AK037838,和在出生后雌性小鼠卵巢中表達異常的1個基因,NONMMUG005147.構建這三個基因的過表達載體,針對骨骼肌發(fā)育的CMV啟動的AK006720和AK037838的過表達載體通過轉染成肌細胞C2C12,驗證其在C2C12細胞表達量,以及對骨骼肌發(fā)育關鍵調控因子MyoG、MyoD、Myf5、Myf6和MEF2c的影響。構建組織特異性ZP3啟動的NONMMUG005147特異性過表達載體,制作轉基因小鼠,以驗證其出生后動物水平的基因功能。結果表明：長鏈非編碼RNA基因AK006720和AK037838分別在出生后小鼠在骨骼肌中第5天比0天表達量顯著升高3-4倍(p0.05)；長鏈非編碼RNARNA-NONMMUT005147在成年雌性小鼠卵巢中相對其它組織(心,肝,脾,腦,骨骼肌)顯著高表達(p0.05),在雌性小鼠出生后3周要比出生2天或5周的在卵巢中表達量顯著升高(p0.05)。然而,AK006720和AK037838對C2C12細胞中對細胞分化和相應骨骼肌發(fā)育因子的表達沒有明顯影響(p0.05)。針對NONMMUG005147基因在3周齡小鼠卵巢中呈現(xiàn)高表達潛能,成功制作新生小鼠3只,但是出生時即被母鼠咬死。通過PCR證明新生小鼠1/3攜帶轉基因,但在小鼠中是否過表達該基因過表達及對卵巢發(fā)育的影響,尚需進一步研究。
【關鍵詞】：長鏈非編碼RNA 小鼠 骨骼肌 卵巢 發(fā)育
【學位授予單位】：昆明理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：Q78;R3416
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-12
• 縮略詞12-13
• 第一章 緒論13-20
• 1.1 引言13
• 1.2 骨骼肌生長發(fā)育的分子機制13-14
• 1.3 非編碼RNA基因與骨骼肌及卵巢發(fā)育機制的研究14-18
• 1.3.1 MicroRNA對骨骼肌生長發(fā)育的研究15
• 1.3.2 LncRNA對骨骼肌生長發(fā)育的研究15-17
• 1.3.2.1 LncRNA在骨骼肌中作用形式16
• 1.3.2.2 LncRNAs在成肌細胞分化中的作用16-17
• 1.3.3 卵巢發(fā)育的調控的研究17-18
• 1.4 本論文研究的目的及意義18-20
• 第二章 小鼠幾種長鏈非編碼RNA篩選與細胞水平基因功能的驗證20-52
• 2.1 引言20
• 2.2 實驗材料與方法20-42
• 2.2.1 實驗動物20
• 2.2.2 實驗試劑20-22
• 2.2.3 主要試劑配制方法22-25
• 2.2.4 主要儀器25-26
• 2.2.5 實驗設計26-42
• 2.2.5.1 實驗一：肌肉相關長鏈非編碼RNA與卵巢發(fā)育相關長鏈非編碼RNA的篩選26-30
• 2.2.5.2 實驗二：AK006720,AK037838及NONMMUG005147過表達載體的構建30-39
• 2.2.5.3 實驗三：AK006720,AK037838在C2C12細胞水平功能驗證39-42
• 2.2.6 統(tǒng)計分析42
• 2.3 實驗結果42-50
• 2.3.1 實驗一：肌肉相關長鏈非編碼RNA與卵巢發(fā)育相關長鏈非編碼RNA的篩選42-45
• 2.3.2 實驗二：AK006720,AK037838及NONMMUG005147過表達載體的構建45-46
• 2.3.3 實驗三：AK006720和AK037838在C2C12細胞功能驗證46-50
• 2.4 討論50-52
• 第三章 非編碼RNA轉基因小鼠的初步研究52-68
• 3.1 引言52
• 3.2 材料與方法52-63
• 3.2.1 實驗動物52
• 3.2.2 實驗試劑52-53
• 3.2.3 主要試劑的配制53
• 3.2.4 主要儀器與設備53-54
• 3.2.5 自制輔助設備54
• 3.2.6 顯微操作針的制備54
• 3.2.7 超數(shù)排卵54-55
• 3.2.8 受精卵獲取55-56
• 3.2.9 顯微注射56-60
• 3.2.9.1 注射用DNA的準備56-58
• 3.2.9.2 顯微操作58-60
• 3.2.10 胚胎培養(yǎng)60
• 3.2.11 胚胎移植60-62
• 3.2.11.1 ICR公鼠結扎60-61
• 3.2.11.2 假孕處理61
• 3.2.11.3 胚胎移植61-62
• 3.2.12 轉非編碼RNA基因小鼠鑒定62-63
• 3.2.12.1 轉基因小鼠鑒定引物的設計62
• 3.2.12.2 PCR反應及電泳62-63
• 3.3 實驗結果63-66
• 3.3.1 EGFP載體胚胎發(fā)育63-65
• 3.3.2 非編碼RNA(ZP3-NONMMUG005147)轉基因小鼠產(chǎn)生65-66
• 3.4 討論66-68
• 第四章 結論68-69
• 致謝69-71
• 參考文獻71-78
• 附錄A 攻讀碩士期間發(fā)表論文目錄78

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 趙曉;莫德林;張悅;龔雯;李安寧;陳瑤生;;豬的骨骼肌生長發(fā)育研究進展[J];生命科學;2011年01期

  本文關鍵詞：小鼠幾種長鏈非編碼RNA基因功能的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：338255