本文關(guān)鍵詞：小鼠幾種長(zhǎng)鏈非編碼RNA基因功能的初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：越來(lái)越多的研究表明,基因突變或修飾是人類疾病的重要病因之一。最新的研究表明,人類基因組中約93%的序列可以被轉(zhuǎn)錄,轉(zhuǎn)錄組中98%基因序列的是不編碼蛋白質(zhì)的非編碼RNA (noncoding RNA, ncRNA),而具有蛋白質(zhì)編碼功能的轉(zhuǎn)錄序列不超過(guò)2%。非編碼RNA包括小ncRNAs和lnc RNAs(long non-coding RNAs).現(xiàn)有的研究表明lncRNAs在表觀遺傳,轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后水平方面控制基因的表達(dá)和維持干細(xì)胞干性、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞增殖和分化、代謝、個(gè)體發(fā)育等幾乎所有關(guān)鍵生命活動(dòng)中發(fā)揮重要的調(diào)控作用,并且與人類多種重大疾病的發(fā)生密切相關(guān),如癌癥發(fā)生、呼吸道疾病、心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病、病毒感染。但是,至今已知功能的lncRNA寥寥無(wú)幾,這就成為了ncRNA功能作用研究的重大障礙。本論文首先從NCBI中通過(guò)QPCR篩選在出生后小鼠骨骼肌中表達(dá)異常的相關(guān)2個(gè)基因,AK006720和AK037838,和在出生后雌性小鼠卵巢中表達(dá)異常的1個(gè)基因,NONMMUG005147.構(gòu)建這三個(gè)基因的過(guò)表達(dá)載體,針對(duì)骨骼肌發(fā)育的CMV啟動(dòng)的AK006720和AK037838的過(guò)表達(dá)載體通過(guò)轉(zhuǎn)染成肌細(xì)胞C2C12,驗(yàn)證其在C2C12細(xì)胞表達(dá)量,以及對(duì)骨骼肌發(fā)育關(guān)鍵調(diào)控因子MyoG、MyoD、Myf5、Myf6和MEF2c的影響。構(gòu)建組織特異性ZP3啟動(dòng)的NONMMUG005147特異性過(guò)表達(dá)載體,制作轉(zhuǎn)基因小鼠,以驗(yàn)證其出生后動(dòng)物水平的基因功能。結(jié)果表明：長(zhǎng)鏈非編碼RNA基因AK006720和AK037838分別在出生后小鼠在骨骼肌中第5天比0天表達(dá)量顯著升高3-4倍(p0.05)；長(zhǎng)鏈非編碼RNARNA-NONMMUT005147在成年雌性小鼠卵巢中相對(duì)其它組織(心,肝,脾,腦,骨骼肌)顯著高表達(dá)(p0.05),在雌性小鼠出生后3周要比出生2天或5周的在卵巢中表達(dá)量顯著升高(p0.05)。然而,AK006720和AK037838對(duì)C2C12細(xì)胞中對(duì)細(xì)胞分化和相應(yīng)骨骼肌發(fā)育因子的表達(dá)沒(méi)有明顯影響(p0.05)。針對(duì)NONMMUG005147基因在3周齡小鼠卵巢中呈現(xiàn)高表達(dá)潛能,成功制作新生小鼠3只,但是出生時(shí)即被母鼠咬死。通過(guò)PCR證明新生小鼠1/3攜帶轉(zhuǎn)基因,但在小鼠中是否過(guò)表達(dá)該基因過(guò)表達(dá)及對(duì)卵巢發(fā)育的影響,尚需進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：長(zhǎng)鏈非編碼RNA 小鼠 骨骼肌 卵巢 發(fā)育
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：Q78;R3416
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-12
• 縮略詞12-13
• 第一章 緒論13-20
• 1.1 引言13
• 1.2 骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育的分子機(jī)制13-14
• 1.3 非編碼RNA基因與骨骼肌及卵巢發(fā)育機(jī)制的研究14-18
• 1.3.1 MicroRNA對(duì)骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育的研究15
• 1.3.2 LncRNA對(duì)骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育的研究15-17
• 1.3.2.1 LncRNA在骨骼肌中作用形式16
• 1.3.2.2 LncRNAs在成肌細(xì)胞分化中的作用16-17
• 1.3.3 卵巢發(fā)育的調(diào)控的研究17-18
• 1.4 本論文研究的目的及意義18-20
• 第二章 小鼠幾種長(zhǎng)鏈非編碼RNA篩選與細(xì)胞水平基因功能的驗(yàn)證20-52
• 2.1 引言20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法20-42
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物20
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑20-22
• 2.2.3 主要試劑配制方法22-25
• 2.2.4 主要儀器25-26
• 2.2.5 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)26-42
• 2.2.5.1 實(shí)驗(yàn)一：肌肉相關(guān)長(zhǎng)鏈非編碼RNA與卵巢發(fā)育相關(guān)長(zhǎng)鏈非編碼RNA的篩選26-30
• 2.2.5.2 實(shí)驗(yàn)二：AK006720,AK037838及NONMMUG005147過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建30-39
• 2.2.5.3 實(shí)驗(yàn)三：AK006720,AK037838在C2C12細(xì)胞水平功能驗(yàn)證39-42
• 2.2.6 統(tǒng)計(jì)分析42
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-50
• 2.3.1 實(shí)驗(yàn)一：肌肉相關(guān)長(zhǎng)鏈非編碼RNA與卵巢發(fā)育相關(guān)長(zhǎng)鏈非編碼RNA的篩選42-45
• 2.3.2 實(shí)驗(yàn)二：AK006720,AK037838及NONMMUG005147過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建45-46
• 2.3.3 實(shí)驗(yàn)三：AK006720和AK037838在C2C12細(xì)胞功能驗(yàn)證46-50
• 2.4 討論50-52
• 第三章 非編碼RNA轉(zhuǎn)基因小鼠的初步研究52-68
• 3.1 引言52
• 3.2 材料與方法52-63
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物52
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑52-53
• 3.2.3 主要試劑的配制53
• 3.2.4 主要儀器與設(shè)備53-54
• 3.2.5 自制輔助設(shè)備54
• 3.2.6 顯微操作針的制備54
• 3.2.7 超數(shù)排卵54-55
• 3.2.8 受精卵獲取55-56
• 3.2.9 顯微注射56-60
• 3.2.9.1 注射用DNA的準(zhǔn)備56-58
• 3.2.9.2 顯微操作58-60
• 3.2.10 胚胎培養(yǎng)60
• 3.2.11 胚胎移植60-62
• 3.2.11.1 ICR公鼠結(jié)扎60-61
• 3.2.11.2 假孕處理61
• 3.2.11.3 胚胎移植61-62
• 3.2.12 轉(zhuǎn)非編碼RNA基因小鼠鑒定62-63
• 3.2.12.1 轉(zhuǎn)基因小鼠鑒定引物的設(shè)計(jì)62
• 3.2.12.2 PCR反應(yīng)及電泳62-63
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果63-66
• 3.3.1 EGFP載體胚胎發(fā)育63-65
• 3.3.2 非編碼RNA(ZP3-NONMMUG005147)轉(zhuǎn)基因小鼠產(chǎn)生65-66
• 3.4 討論66-68
• 第四章 結(jié)論68-69
• 致謝69-71
• 參考文獻(xiàn)71-78
• 附錄A 攻讀碩士期間發(fā)表論文目錄78

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 趙曉;莫德林;張悅;龔雯;李安寧;陳瑤生;;豬的骨骼肌生長(zhǎng)發(fā)育研究進(jìn)展[J];生命科學(xué);2011年01期

  本文關(guān)鍵詞：小鼠幾種長(zhǎng)鏈非編碼RNA基因功能的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：338255