本文關(guān)鍵詞：Ara-C在酵母菌、白血病細(xì)胞和AML小鼠模型中的抗性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:以酵母菌、白血病細(xì)胞、非免疫缺陷AML小鼠為模型,尋找Ara-C抗性相關(guān)基因,研究Ara-C代謝通路中關(guān)鍵基因DCK的變化以及耐藥相關(guān)的抗凋亡途徑的變化。方法:(1)piggyBac(PB)轉(zhuǎn)座系統(tǒng)中的質(zhì)粒構(gòu)建,將PB轉(zhuǎn)座子元件中的PB轉(zhuǎn)座酶序列和識別序列分別連接到兩個穿梭質(zhì)粒中;(2)YHL912菌株對G418的敏感性檢測;(3)采用醋酸鋰轉(zhuǎn)化法,將構(gòu)建好的PB表達(dá)質(zhì)粒、供體質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)入YHL912裂殖酵母中;(4)運用MTT法檢測細(xì)胞對藥物的敏感性;(5)AnnexinV-FITC和PI雙染法檢測ABT-737對白血病細(xì)胞凋亡的影響;(6)采用AML小鼠模型,研究ABT-737與Ara-C的聯(lián)合使用,對小鼠生存情況的影響。結(jié)果:(1)PB轉(zhuǎn)座系統(tǒng)能夠有效地插入酵母基因組中;(2)G418對YHL912酵母菌株的最小抑制濃度為300ug/m L;(3)DCK基因在具有Ara-C抗性的AML細(xì)胞中,存在點突變、缺失突變,表達(dá)降低等現(xiàn)象,隨著抗藥程度的增加,突變比例呈升高趨勢;(4)ABT-737的聯(lián)合使用能夠有效的改善因細(xì)胞內(nèi)部抗性而導(dǎo)致的AML小鼠生存期縮短的現(xiàn)象。結(jié)論:PB轉(zhuǎn)座子二元轉(zhuǎn)座系統(tǒng)能夠有效地插入酵母基因組中,從而為下一步篩選耐藥突變菌株,尋找耐藥相關(guān)的新基因提供了基礎(chǔ);DCK基因在具有Ara-C抗性的AML細(xì)胞中,存在點突變、缺失突變,表達(dá)降低等現(xiàn)象,這可能是導(dǎo)致抗藥性產(chǎn)生的一個重要原因;抗凋亡蛋白抑制劑ABT-737的聯(lián)合使用能夠有效的改善因細(xì)胞內(nèi)部抗性而導(dǎo)致的生存期縮短的現(xiàn)象,說明白血病細(xì)胞具有化療藥物抗性后,仍保持對抗凋亡通路的敏感性。
【關(guān)鍵詞】：PB轉(zhuǎn)座子 酵母 AML細(xì)胞 DCK ABT-737
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.7;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 引言8-11
• 材料與方法11-23
• 一、材料11-13
• 1. 細(xì)胞株11
• 2. 實驗藥品11
• 3. 主要試劑11-12
• 4. 實驗儀器12-13
• 5.主要實驗耗材13
• 二、實驗方法13-23
• 1. 主要試劑的配制13-15
• 2 主要實驗方法15-23
• 實驗結(jié)果23-30
• 1.YHL912酵母菌株生長曲線及對G418的敏感性檢測23-24
• 2.構(gòu)建重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化YHL912酵母菌株24-25
• 3.RT-PCR檢測不同Ara-C抗性的AML細(xì)胞株中DCK表達(dá)情況25-26
• 4.不同Ara-C抗性的AML細(xì)胞株中DCK突變情況檢測26-27
• 5.B117P、B117HS對抗凋亡蛋白抑制劑ABT-737的敏感性分析27-30
• 討論30-32
• 參考文獻(xiàn)32-36
• 綜述 Ara-C代謝相關(guān)基因?qū)ML化療效果的影響36-49
• 參考文獻(xiàn)42-49
• 攻讀學(xué)位期間本人公開出版或發(fā)表的論著、論文49-50
• 中英文縮略詞匯表50-51
• 致謝51-52

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王靜;肖鎮(zhèn);;急性白血病耐藥基因研究與逆轉(zhuǎn)技術(shù)進(jìn)展[J];白血病.淋巴瘤;2007年05期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王靜;急性白血病GST-π與LRP基因及編碼蛋白的臨床研究與檢測[D];內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué);2009年

  本文關(guān)鍵詞：Ara-C在酵母菌、白血病細(xì)胞和AML小鼠模型中的抗性研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：333658