該研究針對不同代次人臍帶間充質干細胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs）進行系統(tǒng)性比較,探索長期傳代培養(yǎng)對其免疫調節(jié)功能的影響及可能的機制。hUC-MSCs反復傳代培養(yǎng)至P5、P10、P15代,對其分化潛能和表面標志物進行鑒定,β-半乳糖苷酶染色及流式細胞術檢測其衰老與凋亡狀況。通過不同條件下與人外周血淋巴細胞共培養(yǎng),比較不同代次hUC-MSCs對淋巴細胞的增殖活性、細胞周期變化及T細胞亞群的調節(jié)作用;ELISA檢測共培養(yǎng)體系中TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6含量。Western blot檢測不同代次hUC-MSCs中PD-L1、IDO的表達。結果表明,傳代培養(yǎng)至P15代,其干細胞生物學特性無明顯改變,但β-半乳糖苷酶染色陽性細胞數顯著升高。三個代次hUC-MSCs均能調控活化后的淋巴細胞周期,并有效抑制其增殖及Th1/Th17細胞亞群,影響炎癥因子的表達,且三個代次間無顯著性差異。相對而言,P15代細胞表現出對Treg亞群及IL-1β的調節(jié)能力下降。長期傳代培養(yǎng)后的hUC-MSCs仍能保持其多向分化潛... 

【文章來源】：中國細胞生物學學報. 2020,42(04)CSCD

【文章頁數】：11 頁

【部分圖文】：

不同代次hUC-MSCs細胞衰老與凋亡檢測

2.5 hUC-MSCs抑制PBMCs炎癥因子的分泌表1 T淋巴細胞在hUC-MSCs作用下細胞周期的比例Table 1 Proportion of cell cycle in T lymphocytes treated with hUC-MSCs 組別Group S期/%S period /% G1期/%G1 period /% G2期/%G2 period /% PBMCs 1.25 ±0.78 97.24±1.35 1.51±0.62 PBMCs+PHA 31.39 ±1.44 64.10±0.72 4.51±0.72 +P5 hUC-MSCs 2.16 ±1.89 96.24±0.78 1.61±1.12 +P10 hUC-MSCs 2.76 ±0.45 96.32±0.11 1.06±0.13 +P15 hUC-MSCs 2.59±0.25 95.86±0.53 1.56±0.28

培養(yǎng)過程中我們觀察到, 隨著傳代次數增加細胞增殖逐漸變緩, hUC-MSCs的生長曲線也反映出P15代細胞增殖速率相較于P5代及P10代細胞更低(圖3A)。因此, 為了驗證hUC-MSCs是否在數次傳代后發(fā)生衰老, 引發(fā)細胞生長阻滯, 我們使用流式細胞術檢測了hUC-MSCs的細胞周期進程, 使用ModFit LT 4.1軟件分別對不同代次細胞G1期、S期、G2期進行擬合(圖3B), 統(tǒng)計各周期所占比例, 結果顯示, 相對于P5代、P10代細胞, P15代hUC-MSCs中處于G1期的細胞比率顯著升高(圖3C, P<0.01)。β-半乳糖苷酶染色也揭示了較高代次hUC-MSCs衰老細胞數目劇增。P5代hUC-MSCs中可見少量衰老細胞, P10代細胞中衰老細胞有所增加但無顯著性差異, 至P15代時細胞衰老率則顯著增高(圖4A和圖4B, P<0.05、P<0.01)。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]長期傳代培養(yǎng)對人臍帶間充質干細胞生物學特性的影響[J]. 張權,張亞奇,饒巍,周端鵬,韓兵,武棟成.  中國細胞生物學學報. 2019(01)



本文編號：3250995