該研究針對(duì)不同代次人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs）進(jìn)行系統(tǒng)性比較,探索長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)對(duì)其免疫調(diào)節(jié)功能的影響及可能的機(jī)制。hUC-MSCs反復(fù)傳代培養(yǎng)至P5、P10、P15代,對(duì)其分化潛能和表面標(biāo)志物進(jìn)行鑒定,β-半乳糖苷酶染色及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其衰老與凋亡狀況。通過(guò)不同條件下與人外周血淋巴細(xì)胞共培養(yǎng),比較不同代次hUC-MSCs對(duì)淋巴細(xì)胞的增殖活性、細(xì)胞周期變化及T細(xì)胞亞群的調(diào)節(jié)作用;ELISA檢測(cè)共培養(yǎng)體系中TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6含量。Western blot檢測(cè)不同代次hUC-MSCs中PD-L1、IDO的表達(dá)。結(jié)果表明,傳代培養(yǎng)至P15代,其干細(xì)胞生物學(xué)特性無(wú)明顯改變,但β-半乳糖苷酶染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著升高。三個(gè)代次hUC-MSCs均能調(diào)控活化后的淋巴細(xì)胞周期,并有效抑制其增殖及Th1/Th17細(xì)胞亞群,影響炎癥因子的表達(dá),且三個(gè)代次間無(wú)顯著性差異。相對(duì)而言,P15代細(xì)胞表現(xiàn)出對(duì)Treg亞群及IL-1β的調(diào)節(jié)能力下降。長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)后的hUC-MSCs仍能保持其多向分化潛... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2020,42(04)CSCD

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【部分圖文】：

不同代次hUC-MSCs細(xì)胞衰老與凋亡檢測(cè)

2.5 hUC-MSCs抑制PBMCs炎癥因子的分泌表1 T淋巴細(xì)胞在hUC-MSCs作用下細(xì)胞周期的比例Table 1 Proportion of cell cycle in T lymphocytes treated with hUC-MSCs 組別Group S期/%S period /% G1期/%G1 period /% G2期/%G2 period /% PBMCs 1.25 ±0.78 97.24±1.35 1.51±0.62 PBMCs+PHA 31.39 ±1.44 64.10±0.72 4.51±0.72 +P5 hUC-MSCs 2.16 ±1.89 96.24±0.78 1.61±1.12 +P10 hUC-MSCs 2.76 ±0.45 96.32±0.11 1.06±0.13 +P15 hUC-MSCs 2.59±0.25 95.86±0.53 1.56±0.28

培養(yǎng)過(guò)程中我們觀察到, 隨著傳代次數(shù)增加細(xì)胞增殖逐漸變緩, hUC-MSCs的生長(zhǎng)曲線也反映出P15代細(xì)胞增殖速率相較于P5代及P10代細(xì)胞更低(圖3A)。因此, 為了驗(yàn)證hUC-MSCs是否在數(shù)次傳代后發(fā)生衰老, 引發(fā)細(xì)胞生長(zhǎng)阻滯, 我們使用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了hUC-MSCs的細(xì)胞周期進(jìn)程, 使用ModFit LT 4.1軟件分別對(duì)不同代次細(xì)胞G1期、S期、G2期進(jìn)行擬合(圖3B), 統(tǒng)計(jì)各周期所占比例, 結(jié)果顯示, 相對(duì)于P5代、P10代細(xì)胞, P15代hUC-MSCs中處于G1期的細(xì)胞比率顯著升高(圖3C, P<0.01)。β-半乳糖苷酶染色也揭示了較高代次hUC-MSCs衰老細(xì)胞數(shù)目劇增。P5代hUC-MSCs中可見(jiàn)少量衰老細(xì)胞, P10代細(xì)胞中衰老細(xì)胞有所增加但無(wú)顯著性差異, 至P15代時(shí)細(xì)胞衰老率則顯著增高(圖4A和圖4B, P<0.05、P<0.01)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[J]. 張權(quán),張亞奇,饒巍,周端鵬,韓兵,武棟成.  中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2019(01)



本文編號(hào)：3250995