生物醫(yī)藥領(lǐng)域的蓬勃發(fā)展推動著單克隆抗體下游純化技術(shù)的不斷進(jìn)步。目前用于抗體純化的蛋白A親和配基,存在價格昂貴、配基脫落造成二次污染、配基穩(wěn)定性差等問題。探索新型高品質(zhì)親和配基已成為抗體純化亟待突破的瓶頸。多肽親和配基可以彌補(bǔ)蛋白A配基的缺陷性,成為近些年的研究熱點。但其設(shè)計方法屬于虛篩,存在漏選、假陽性等問題。因此建立一種新型的配基精準(zhǔn)篩選技術(shù)具有重要意義。核磁共振飽和轉(zhuǎn)移差譜（Saturation transfer difference nuclear magnetic resonance spectroscopy,STD-NMR）具有可在真實吸附環(huán)境中實現(xiàn)篩選、蛋白大小不受尺寸限制等優(yōu)點。因此,本文將該方法用于仿生多肽配基特異性的篩選方法建立,并以等溫滴定量熱法（Isothermal titration calorimetry,ITC）和石英晶體微天平（Quartz crystal microbalance with dissipation,QCM-D）從熱力學(xué)和吸附層分子排布形式對STD-NMR方法進(jìn)行了驗證,最后將所篩選出的多肽親和配基應(yīng)用于抗體親和介質(zhì)的制備和抗體的純化。本論... 

【文章來源】：中國科學(xué)院大學(xué)(中國科學(xué)院過程工程研究所)北京市

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號說明
第1章 引言
    1.1 前言
    1.2 單克隆抗體的應(yīng)用前景
    1.3 抗體親和配基的發(fā)展現(xiàn)狀
        1.3.1 蛋白配基
        1.3.2 化學(xué)合成配基
        1.3.3 仿生多肽配基
    1.4 配基與蛋白質(zhì)相互作用的研究方法
        1.4.1 核磁共振飽和轉(zhuǎn)移差譜(STD-NMR)
        1.4.2 等溫滴定量熱法(ITC)
        1.4.3 石英晶體微天平(QCM)
    1.5 立題依據(jù)和目標(biāo)
        1.5.1 立題依據(jù)
        1.5.2 研究目標(biāo)
第2章 建立STD-NMR配基篩選方法學(xué)
    2.1 引言
    2.2 實驗材料與方法
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 實驗儀器
        2.2.3 核磁共振實驗條件
        2.2.4 等溫滴定量熱法實驗條件
        2.2.5 石英晶體微天平實驗條件
        2.2.6 多肽配基的STD-NMR非競爭性滴定實驗
        2.2.7 仿生多肽瓊脂糖微球的制備
        2.2.8 親和層析中多肽配基的非特異性評價
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 基于配基取向篩選的實驗
        2.3.2 競爭性STD-NMR實驗
        2.3.3 非競爭性STD-NMR滴定實驗
        2.3.4 特異性和非特異性作用的熱力學(xué)差異
        2.3.5 特異性和非特異性作用的吸附層分子排布形式差異
        2.3.6 將STD-NMR非競爭性滴定方法用于仿生多肽配基的篩選
    2.4 本章小結(jié)
第3章 多肽配基親和介質(zhì)分離純化性能的評價
    3.1 引言
    3.2 實驗材料與方法
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 實驗儀器
        3.2.3 仿生多肽超大孔Dextran-PGMA微球的制備
        3.2.4 仿生多肽超大孔Dextran-PGMA微球的評價
        3.2.5 仿生多肽超大孔Dextran-PGMA微球的性能評價
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 仿生多肽超大孔Dextran-PGMA微球的制備
        3.3.2 親和介質(zhì)的色譜性能評價
        3.3.3 分離實際體系
    3.4 本章小結(jié)
第4章 結(jié)論和展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 創(chuàng)新點
    4.3 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷及攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果



本文編號：3250278