發(fā)布時(shí)間：2021-06-26 00:19

　　第一部分激活PPARγ對凝血酶活化的小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬能力及CD36表達(dá)的影響目的:探討調(diào)控PPARγ對凝血酶活化的小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬能力及CD36表達(dá)的影響。方法:新生SD大鼠腦組織進(jìn)行原代小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng),將培養(yǎng)成功并分離純化的原代小膠質(zhì)細(xì)胞隨機(jī)分為4組:正常組（Control）、凝血酶刺激組（TH）、PPARγ激動(dòng)劑組（RSG）、PPARγ抑制劑組（GW9662）。免疫熒光顯微鏡對OX42標(biāo)記的小膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定,激光共聚焦顯微鏡觀察各組小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬紅色熒光微球的能力,采用Western-Blot、RT-PCR檢測各組PPARγ和CD36蛋白以及相應(yīng)m RNA的表達(dá)水平。結(jié)果:免疫熒光顯微鏡檢測到小膠質(zhì)細(xì)胞純化率在95%以上,激光共聚焦顯示各組小膠質(zhì)細(xì)胞均不同程度吞噬紅色熒光微球,PPARγ激動(dòng)劑組（RSG）較其它組明顯增加,PPARγ抑制劑組（GW9662組）較激動(dòng)劑組和正常對照組吞噬數(shù)量顯著減少。Western-Blot和RT-PCR結(jié)果均顯示各組有PPARγ、CD36蛋白及m RNA的表達(dá),PPARγ激動(dòng)劑組（RSG組）PPARγ、CD36蛋白及m RNA表達(dá)較正常組、凝血酶刺激組... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

原代小膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)（×100）

染色后見細(xì)胞核呈藍(lán)色，散在分布，上述圖片經(jīng)Merge處理后重疊率達(dá)95%以上，證實(shí)鏡下所見小膠質(zhì)細(xì)胞占95%以上；一抗對照組可見FITC無細(xì)胞著色，DAPI染色可見細(xì)胞核，Merge重疊后未見細(xì)胞著色（見圖2）圖2 免疫熒光染色鑒定小膠質(zhì)細(xì)胞（×200）注：OX42標(biāo)記細(xì)胞后見小膠質(zhì)細(xì)胞呈草綠色，DAPI標(biāo)記細(xì)胞核為藍(lán)色，兩組圖Merge后，重疊率在95%以上。3. 激光共聚焦顯微鏡對小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬能力的檢測小膠質(zhì)細(xì)胞作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)重要免疫細(xì)胞，在外界因素刺激下通常表現(xiàn)出吞噬作和炎癥細(xì)胞作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在激光共聚焦顯微鏡下（×400）可見各組均表現(xiàn)出吞噬作用，TH組較組吞噬紅色熒光微球數(shù)量增多，RSG組吞噬數(shù)量較Control和TH組明顯增多

17能力明顯強(qiáng)于其他組,而使用PPARγ拮抗劑后小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬能力明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）（見圖3）。圖3 激光共聚焦顯微鏡下各組小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬紅色熒光微球注：RSG組吞噬紅色微球較TH組和正常組增多，GW9662組吞噬的紅色微球明顯少于RSG組4. PPARγ的表達(dá)4.1 PPARγ蛋白的表達(dá)采用Western blot法檢測PPARγ蛋白的表達(dá)，其結(jié)果顯示PPARγ蛋白在Control組、TH組、RSG組以及GW9662組中均有表達(dá)，其中RSG組較其他組顯著增加，明顯高于TH組和Control組，統(tǒng)計(jì)學(xué)上均有差異（P<0.01）,TH組的表達(dá)較Control組增加，統(tǒng)計(jì)學(xué)上有差異（P<0.01），而在使用拮抗劑組的GW9662組較RSG組的表達(dá)下降


本文編號：3250242