第一部分激活PPARγ對凝血酶活化的小膠質細胞吞噬能力及CD36表達的影響目的:探討調控PPARγ對凝血酶活化的小膠質細胞吞噬能力及CD36表達的影響。方法:新生SD大鼠腦組織進行原代小膠質細胞培養(yǎng),將培養(yǎng)成功并分離純化的原代小膠質細胞隨機分為4組:正常組（Control）、凝血酶刺激組（TH）、PPARγ激動劑組（RSG）、PPARγ抑制劑組（GW9662）。免疫熒光顯微鏡對OX42標記的小膠質細胞進行鑒定,激光共聚焦顯微鏡觀察各組小膠質細胞吞噬紅色熒光微球的能力,采用Western-Blot、RT-PCR檢測各組PPARγ和CD36蛋白以及相應m RNA的表達水平。結果:免疫熒光顯微鏡檢測到小膠質細胞純化率在95%以上,激光共聚焦顯示各組小膠質細胞均不同程度吞噬紅色熒光微球,PPARγ激動劑組（RSG）較其它組明顯增加,PPARγ抑制劑組（GW9662組）較激動劑組和正常對照組吞噬數(shù)量顯著減少。Western-Blot和RT-PCR結果均顯示各組有PPARγ、CD36蛋白及m RNA的表達,PPARγ激動劑組（RSG組）PPARγ、CD36蛋白及m RNA表達較正常組、凝血酶刺激組... 

【文章來源】：蘇州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

原代小膠質細胞的培養(yǎng)（×100）

染色后見細胞核呈藍色，散在分布，上述圖片經(jīng)Merge處理后重疊率達95%以上，證實鏡下所見小膠質細胞占95%以上；一抗對照組可見FITC無細胞著色，DAPI染色可見細胞核，Merge重疊后未見細胞著色（見圖2）圖2 免疫熒光染色鑒定小膠質細胞（×200）注：OX42標記細胞后見小膠質細胞呈草綠色，DAPI標記細胞核為藍色，兩組圖Merge后，重疊率在95%以上。3. 激光共聚焦顯微鏡對小膠質細胞吞噬能力的檢測小膠質細胞作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)重要免疫細胞，在外界因素刺激下通常表現(xiàn)出吞噬作和炎癥細胞作用，實驗結果顯示，在激光共聚焦顯微鏡下（×400）可見各組均表現(xiàn)出吞噬作用，TH組較組吞噬紅色熒光微球數(shù)量增多，RSG組吞噬數(shù)量較Control和TH組明顯增多

17能力明顯強于其他組,而使用PPARγ拮抗劑后小膠質細胞吞噬能力明顯下降，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）（見圖3）。圖3 激光共聚焦顯微鏡下各組小膠質細胞吞噬紅色熒光微球注：RSG組吞噬紅色微球較TH組和正常組增多，GW9662組吞噬的紅色微球明顯少于RSG組4. PPARγ的表達4.1 PPARγ蛋白的表達采用Western blot法檢測PPARγ蛋白的表達，其結果顯示PPARγ蛋白在Control組、TH組、RSG組以及GW9662組中均有表達，其中RSG組較其他組顯著增加，明顯高于TH組和Control組，統(tǒng)計學上均有差異（P<0.01）,TH組的表達較Control組增加，統(tǒng)計學上有差異（P<0.01），而在使用拮抗劑組的GW9662組較RSG組的表達下降


本文編號：3250242