目的克隆、表達細粒棘球絳蟲磷酸甘油酸變位酶（EgPGAM）,分析其免疫反應性及其在原頭節(jié)、包囊及成蟲中的分布情況,對EgPGAM的診斷價值進行初步評價。方法提取細粒棘球蚴原頭節(jié)RNA,逆轉(zhuǎn)錄為cDNA, PCR擴增EgPGAM基因,測序。通過多種生物信息學軟件分析EgPGAM的理化性質(zhì)、保守結(jié)構(gòu)域、抗原表位和同源性等。利用Mega 5.0軟件進行序列特征分析,采用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)進化樹。將EgPGAM基因連接至pET32a表達載體,轉(zhuǎn)入大腸埃希菌（E. coli） BL21（DE3）中進行誘導表達,鎳柱純化,十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分析其表達情況并進行蛋白質(zhì)免疫印跡（Western blotting）分析。免疫熒光定位分析EgPGAM在原頭節(jié)、包囊及成蟲中的分布。采用ELISA評價EgPGAM的診斷價值。結(jié)果 EgPGAM長756 bp,共編碼251個氨基酸,編碼蛋白的相對分子質(zhì)量（Mr）約28 000,等電點為8.29,不含信號肽,無跨膜區(qū)。EgPGAM含有12個高保守的氨基酸位點、 3個保守的催化活性位點、 1個底物結(jié)合位點和7個B抗原表位。EgPGAM... 

【文章來源】：中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志. 2020,38(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

Eg PGAM PCR擴增結(jié)果

SDS-PAGE結(jié)果顯示，Eg PGAM在E.coli BL21(DE3）中大量表達，主要以可溶蛋白形式存在于上清中，約為Mr48 000（標簽約Mr20 000）（圖4）。Western blotting分析結(jié)果顯示，Eg PGAM可與感染細粒棘球蚴的綿羊血清反應，不與健康綿羊陰性血清反應，具有較好的免疫反應性。兔抗Eg PGAM-IgG與原頭節(jié)總蛋白孵育，只顯示單一條帶，大小與Eg PGAM一致（圖4）。2.4 Eg PGAM的免疫熒光定位

免疫熒光定位實驗結(jié)果顯示，細粒棘球蚴階段，Eg PGAM分布于原頭節(jié)表皮層、頂突溝上和包囊生發(fā)層；細粒棘球絳蟲階段，Eg PGAM均勻地分布于薄壁組織中，蟲卵中無分布（圖5）。2.5 間接ELISA測定的Eg PGAM敏感性和特異性

【參考文獻】：
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