目的獲得長(zhǎng)爪沙鼠非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）模型中CDC42作用蛋白4（CIP4）基因的表達(dá)規(guī)律及是否受β連環(huán)蛋白（β-catenin）調(diào)控的證據(jù)。方法 3月齡雄性長(zhǎng)爪沙鼠30只采用隨機(jī)數(shù)字表法分為正常組6只和模型組24只,模型組按飼喂高脂飼料的時(shí)間不同分為2周組、4周組、8周組、12周組,每組6只。按組采集肝臟大葉標(biāo)本4份,HE染色及Masson染色檢測(cè)肝臟的病理變化,熒光定量PCR（q PCR）法檢測(cè)CIP4 m RNA相對(duì)表達(dá)量,蛋白免疫印跡（Western blot）法檢測(cè)CIP4蛋白相對(duì)表達(dá)量,免疫共沉淀（Co IP）驗(yàn)證CIP4與β-catenin的相互作用。結(jié)果肝病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示,隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng),模型組沙鼠均出現(xiàn)肝臟脂肪病變（單純脂肪肝,2～4周造模,S0～S1）,脂肪性肝炎（4～8周造模,脂堆積形成肝細(xì)胞的腫脹,壞死和空泡,少量纖維化出現(xiàn),S1～S2）,肝纖維化（8～12周造模,S2～S3）,部分有假小葉形成。q PCR和Western blot結(jié)果顯示,隨著造模時(shí)間延長(zhǎng),CIP4 m RNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量均下降。模型組被Co IP下來(lái)的CIP4蛋白明顯下降... 

【文章來(lái)源】：浙江醫(yī)學(xué). 2020,42(10)

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各組沙鼠CIP4 m RNA相對(duì)表達(dá)量比較（a:CIP4基因的熔解曲線；b:CIP4基因的擴(kuò)增曲線；c：內(nèi)參GAPDH的熔解曲線；d：內(nèi)參GAPDH的擴(kuò)增曲線；e：各組沙鼠CIP4 m RNA相對(duì)表達(dá)量，與Z組比較，*P<0.05)

圖2 各組沙鼠CIP4 m RNA相對(duì)表達(dá)量比較（a:CIP4基因的熔解曲線；b:CIP4基因的擴(kuò)增曲線；c：內(nèi)參GAPDH的熔解曲線；d：內(nèi)參GAPDH的擴(kuò)增曲線；e：各組沙鼠CIP4 m RNA相對(duì)表達(dá)量，與Z組比較，*P<0.05)2.4 CIP4與β-catenin的相互作用

最新的肝纖維化相關(guān)研究進(jìn)展認(rèn)為促纖維化因子（TGF-β1、NF-κB、腎素、血管緊張素等）上調(diào)了細(xì)胞外基質(zhì)基因表達(dá)，同時(shí)抑纖維化因子IFN-γ致促膠原降解基因表達(dá)下降，致膠原過(guò)量堆積而致纖維化[10]，以上理論中關(guān)于CIP4的作用尚是空白。抑制不同細(xì)胞中CIP4基因后導(dǎo)致細(xì)胞多種分化結(jié)果，其中一種是纖維化，這說(shuō)明調(diào)節(jié)該基因可以用來(lái)研究肝纖維化的發(fā)生機(jī)制。CIP4是PCH家族的一個(gè)成員，具有與磷脂酰絲氨酸結(jié)合的FER類(lèi)似區(qū)和一個(gè)SH3區(qū)域。該基因的轉(zhuǎn)錄激活/抑制主要取決于其3個(gè)結(jié)構(gòu)域，一個(gè)是TR-RXR/PPAR-RXR二聚體的結(jié)合區(qū)（FCH區(qū)），一個(gè)是CDC42結(jié)合的HR1區(qū)，另一個(gè)是SH3區(qū)，即富含脯氨酸，可與下游特定泛素化的靶蛋白結(jié)合[11]。腫瘤細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和腎纖維化研究表明CIP4可通過(guò)SH3區(qū)的脯氨酸與β-catenin結(jié)合，而β-catenin（第654位點(diǎn)酪氨酸殘基）磷酸化易被泛素化降解，鑒于β-catenin是一個(gè)經(jīng)典的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白，因此可能通過(guò)與CIP4結(jié)合而對(duì)CIP4表達(dá)起調(diào)節(jié)作用[6,12]。本研究中CoIP法結(jié)果表明，M組中CIP4與β-catenin之間結(jié)合程度小于Z組，而且可能隨著肝纖維化的發(fā)展結(jié)合程度越來(lái)越小。結(jié)合該基因在其他領(lǐng)域[13-14]的研究進(jìn)展推斷隨著NAFLD病程的進(jìn)展，CIP4內(nèi)吞作用的破壞導(dǎo)致β-catenin出現(xiàn)核轉(zhuǎn)位，細(xì)胞極性發(fā)生變化，致使肝細(xì)胞黏附連接復(fù)合物（上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化過(guò)程中的一種細(xì)胞形態(tài)）的完整性不能維持，從而促進(jìn)肝細(xì)胞轉(zhuǎn)分化過(guò)程，其結(jié)果是肝實(shí)質(zhì)逐漸為肝星狀細(xì)胞取代，肝臟逐漸纖維化，這時(shí)肝臟外觀上看是從柔軟趨向硬化的過(guò)程。綜上所述，長(zhǎng)爪沙鼠NAFLD模型中CIP4隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng)，呈現(xiàn)出低表達(dá)的趨勢(shì)，可能與炎癥及纖維化有關(guān)且受β-catenin的調(diào)控。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]長(zhǎng)爪沙鼠肝臟基因組DNA甲基化水平檢測(cè)[J]. 王志遠(yuǎn),劉月環(huán).  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué). 2018(01)
[2]長(zhǎng)爪沙鼠NAFLD模型的建立及其遺傳學(xué)的研究[J]. 劉月環(huán),吳舊生,應(yīng)華忠,徐承富,石巧娟,余陳歡.  中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志. 2017(05)

碩士論文
[1]CIP4在腎臟纖維化中的表達(dá)及其與β-catenin的關(guān)系[D]. 張亞敏.華中科技大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3240345