目的利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)構(gòu)建APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默�。ˋD）小鼠模型,為開展AD的病因治療提供載體。方法采用CRISPR/Cas9系統(tǒng),選擇H11作為插入位點(diǎn),將有活性的sgRNA、Cas9 RNA和含有目標(biāo)同源重組序列的載體顯微注射入C57BL/6品系野生雌性小鼠的受精卵中,鑒定得到的F0代陽性小鼠再與C57BL/6野生小鼠交配,從而獲得F1代小鼠。對(duì)鑒定得到的F1代雜合子小鼠,選擇來自同一只F0代小鼠基因型一致的F1代雜合子小鼠,達(dá)到性成熟后進(jìn)行同胞交配,獲得F2代小鼠。采用PCR方法鑒定F2代小鼠的基因型結(jié)果,采用Western blot檢測(cè)APP和PS1在F2代小鼠腦組織中的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果 27只F2代小鼠經(jīng)PCR鑒定基因型,5只F2代小鼠出現(xiàn)約344 bp和608 bp的目的基因條帶,表明成功構(gòu)建出轉(zhuǎn)入APP和PS1基因的APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因AD小鼠。Western blot檢測(cè)顯示APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因AD小鼠的APP和PS1的表達(dá)水平均明顯高于同窩野生型小鼠。結(jié)論利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)可成功構(gòu)建APPs... 

【文章來源】：浙江醫(yī)學(xué). 2020,42(15)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

小鼠H11位點(diǎn)及含有APPswe和PS1d E9同源重組序列的載體構(gòu)建圖

sg RNA體外相對(duì)活性

sg RNA評(píng)分及脫靶分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]高效切割Hipp11敲入位點(diǎn)的sgRNA設(shè)計(jì)及活性驗(yàn)證[J]. 吳曦,周舒雅,劉甦蘇,谷文達(dá),左琴,李保文,賀爭(zhēng)鳴,范昌發(fā).  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué). 2015(05)



本文編號(hào)：3240979