目的探討小鼠高糖記憶模型中足細(xì)胞向上皮間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化（EMT）的機(jī)制。方法將小鼠腎小球足細(xì)胞分為4組:正糖組（5.5 mmol/L D-葡萄糖）、高糖組（30 mmol/L D-葡萄糖）、記憶組（先30 mmol/L D-葡萄糖,后5.5 mmol/L D-葡萄糖）、滲透壓組（5.5 mmol/LD-葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇）,除記憶組作用96 h外,其余組均作用48 h。Western blotting及免疫熒光檢測各組足細(xì)胞EMT指標(biāo)腎病蛋白（Nephrin）及α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）的表達(dá)。采用Illumina HiSeq 2000進(jìn)行正糖組、高糖組及記憶組的轉(zhuǎn)錄組測序,DESeq鑒定差異表達(dá)基因,并對差異表達(dá)基因進(jìn)行GO及KEGG富集分析。最后采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測差異表達(dá)基因的表達(dá)。結(jié)果與正糖組相比,Western blotting與免疫熒光檢測均顯示高糖組與記憶組的足細(xì)胞Nephrin表達(dá)減少、α-SMA表達(dá)增加（P<0.05）,而滲透壓組與正糖組,記憶組與高糖組足細(xì)胞Nephrin、α-SMA的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。RNA... 

【文章來源】：解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 2020,45(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【圖文】：

小鼠足細(xì)胞實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測差異基因的表達(dá)

分別抽提正糖組、高糖組及記憶組的足細(xì)胞RNA，并行轉(zhuǎn)錄組測序。熱圖反映了差異表達(dá)基因及樣本的垂直聚類結(jié)果，紅色代表上調(diào)，綠色為下調(diào)(圖3)。與正糖組相比，高糖組共有194個(gè)基因存在差異表達(dá)，其中119個(gè)上調(diào)，75個(gè)下調(diào)(圖4A),記憶組共有532個(gè)基因存在差異表達(dá)，其中316個(gè)上調(diào)，216個(gè)下調(diào)(圖4B)。因高糖記憶的分子本質(zhì)系高糖誘導(dǎo)的細(xì)胞基因表達(dá)異常，在血糖正常后仍然持續(xù)存在，故對上述兩組差異表達(dá)的基因進(jìn)行再分析，發(fā)現(xiàn)108個(gè)基因(35個(gè)上調(diào)，73個(gè)下調(diào))在高糖組及記憶組存在相似的表達(dá)規(guī)律，并將這些基因稱為共有差異表達(dá)基因。圖2 各組小鼠足細(xì)胞Nephrin蛋白(A)及α-SMA蛋白(B)的免疫熒光染色(×400)

各組小鼠足細(xì)胞Nephrin蛋白(A)及α-SMA蛋白(B)的免疫熒光染色(×400)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3240027