目的研究細(xì)粒棘球蚴囊液對體外培養(yǎng)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞TLR2和IDO表達(dá)的影響。方法制備小鼠脾臟淋巴細(xì)胞懸液,接種于24孔培養(yǎng)板中進(jìn)行培養(yǎng),用不同濃度比的包蟲囊液（1∶10、1∶100）進(jìn)行干預(yù)。分別在干預(yù)后12、24、36 h收集2份細(xì)胞及1份細(xì)胞培養(yǎng)上清,一份細(xì)胞用于Trizol法提取總RNA,通過實時熒光定量PCR檢測TLR2、IDO、IL-5的mRNA相對表達(dá)水平,另一份細(xì)胞采用Western blot方法檢測TLR2、IDO蛋白。細(xì)胞上清中的IL-6、TGF-β含量采用ELISA法檢測。對小鼠脾臟淋巴細(xì)胞中IDO與TLR2 mRNA的表達(dá)進(jìn)行線性相關(guān)分析。結(jié)果實時熒光定量PCR檢測HCF為1∶10、1∶100時均可上調(diào)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞TLR2、IDO、IL-5 mRNA的表達(dá),其中1∶100稀釋的HCF在24h時分別為0.282±0.144、0.218±0.036、0.648±0.148,與對照組0.006±0.003、0.002±0.000、0.008±0.001比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;Western blot檢測TLR2和IDO的表達(dá)均可被HCF上調(diào),且... 

【文章來源】：中國病原生物學(xué)雜志. 2020,15(06)北大核心CSCD

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小鼠脾臟淋巴細(xì)胞TLR2、IDO、IL-5 mRNA相對表達(dá)量

ELISA檢測小鼠脾臟淋巴細(xì)胞上清中的IL-6、TGF-β,結(jié)果如圖3。其中IL-6在陰性對照組、LPS組、1∶100 HCF組和1∶10 HCF組分別為(67.328±5.839) pg/ml、(248.293±21.350) pg/ml、(296.495±12.495) pg/ml和(183.915±7.473) pg/ml,TGF-β分別為(324.200±8.065) pg/ml、(374.600±9.365) pg/ml、(449.700±5.350) pg/ml和(419.800± 8.875) pg/ml。低濃度和高濃度HCF對體外培養(yǎng)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞干預(yù)24 h,IL-6和TGF-β水平與陰性組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(低濃度HCF下,IL-6:t=16.62,P<0.01,TGF-β:t=12.97,P<0.01;高濃度HCF下,IL-6:t=12.29,P<0.01,TGF-β:t=7.98,P<0.05),以低濃度HCF干預(yù)下增高更顯著。在低濃度、高濃度HCF刺激下的細(xì)胞上清IL-6水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=7.73,P<0.05)。

表5 不同時間點(diǎn)TLR2及IDO蛋白的灰度值 ( x ˉ ±s) Table 5 The gray-scale scanning of TLR2 and IDO proteins at different time points 組別 Group 12 h 24 h 36 h TLR 2 陰性對照組 0.171±0.016 0.075±0.006 0.110±0.007 LPS組 0.416±0.046 0.277±0.026 0.577±0.066 1∶100 HCF組 0.398±0.043 0.397±0.020 0.828±0.118 1∶10 HCF組 0.350±0.025 0.322±0.008 0.977±0.019 IDO 陰性對照組 0.586±0.093 0.332±0.022 0.847±0.083 LPS組 0.344±0.126 0.906±0.083 0.561±0.045 1∶100 HCF組 0.670±0.064 0.707±0.093 1.173±0.106 1∶10 HCF組 0.590±0.037 0.614±0.020 0.377±0.050當(dāng)HCF濃度為1∶100、1∶10時,均可檢測出TLR2和IDO蛋白的表達(dá)。在1∶100HCF與1∶10HCF干預(yù)下,細(xì)胞TLR2及IDO均高表達(dá),且在低濃度HCF刺激下,TLR2和IDO表達(dá)量隨刺激時間延長而增加。經(jīng)蛋白灰度掃描,36 h時TLR2及IDO的表達(dá)量較12 h時分別上調(diào)2.1倍和1.8倍;高濃度HCF刺激下,TLR2的表達(dá)量隨刺激時間延長而增加,36 h時較12 h上調(diào)2.8倍,而IDO的表達(dá)量隨刺激時間延長而減少,36 h時下調(diào)36%。

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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本文編號：3226014