目的探討WalK（S221P）突變對萬古霉素中等耐藥金黃色葡萄球菌（vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus, VISA）毒力的影響及其機(jī)制。方法采用轉(zhuǎn)錄組測序比較VISA菌株XN108及其WalK（S221P）回復(fù)菌株K65的毒力基因表達(dá)差異,利用RT-qPCR檢測菌株毒力基因的表達(dá)變化,溶血實(shí)驗(yàn)比較菌株的溶血能力。采用同源重組技術(shù)在金葡菌中引入WalK（S221P）突變,E-test檢測菌株的耐藥性。凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)（EMSA）檢測WalKR對靶基因調(diào)控區(qū)的結(jié)合能力。結(jié)果轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果顯示,K65中多種重要毒力因子基因的表達(dá)上調(diào)（P<0.01）,調(diào)控系統(tǒng)Agr的活性增強(qiáng),溶血能力恢復(fù)。將WalK（S221P）突變引入U(xiǎn)SA300菌株后,其耐藥性升高,毒力因子表達(dá)水平及溶血活性降低;EMSA證實(shí)WalKR對金葡菌Agr有直接調(diào)控作用;敲除agrA基因后,引入WalK（S221P）突變?nèi)钥墒筓SA300agrA對萬古霉素的耐藥性升高,但毒力基因的表達(dá)水平及溶血活性改變不顯著。結(jié)論 WalK（S221P）突變影響VISA毒力是通過Agr... 

【文章來源】：第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,42(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)菌株、質(zhì)粒與試劑
    1.2 轉(zhuǎn)錄組測序與分析
    1.3 RT-qPCR
    1.4 溶血實(shí)驗(yàn)
    1.5 突變菌株構(gòu)建
    1.6 E-test實(shí)驗(yàn)
    1.7 EMSA實(shí)驗(yàn)
    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 WalK(S221P)突變回復(fù)后金葡菌主要毒力基因表達(dá)上調(diào)
    2.2 WalK(S221P)突變回復(fù)后金葡菌溶血能力增強(qiáng)
    2.3 在強(qiáng)毒力MRSA菌株中引入WalK(S221P)突變后萬古霉素耐藥性升高
    2.4 引入WalK(S221P)突變后金葡菌毒力基因表達(dá)水平及溶血能力下降
    2.5 WalKR對Agr具有直接調(diào)控作用
    2.6 WalK(S221P)突變通過Agr影響VISA菌株的毒力
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]SigB（Q225P）突變促進(jìn)金黃色葡萄球菌生物被膜形成[J]. 劉慧,尚偉龍,彭華剛,周坤,胡珍,周人杰,饒賢才.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(08)



本文編號：3206746