本文關(guān)鍵詞：巨噬細(xì)胞Coronin-1的表達(dá)與非Mtb源性自噬相關(guān)性的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究巨噬細(xì)胞Coronin-1與非Mtb源性細(xì)胞自噬的相關(guān)性及其可能信號通路。方法:分別構(gòu)建過表達(dá)Coronin-1的p EGFP-C1-Coronin-1質(zhì)粒和干擾Coronin-1表達(dá)的p Genesil-1-Coronin-1質(zhì)粒,通過G418加壓篩選其RAW264.7細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染株,即Coronin-1高表達(dá)細(xì)胞株(RAW264.7-Cor.Plus)和Coronin-1低表達(dá)細(xì)胞株(RAW264.7-Cor.Minus)。將RAW264.7-Cor.Plus組、RAW264.7組和RAW264.7-Cor.Minus組細(xì)胞分別采取完全培養(yǎng)基(空白處理對照)、饑餓、雷帕霉素、環(huán)孢素A等因素處理后,通過RT-PCR法檢測Beclin-1的基因轉(zhuǎn)錄水平,Western blot法檢測Coronin-1、LC3BⅡ/LC3BⅠ及Beclin-1的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:Coronin-1過表達(dá)質(zhì)粒和siRNA質(zhì)粒均構(gòu)建成功,其細(xì)胞穩(wěn)定篩選株具有過表達(dá)或抑制表達(dá)Coronin-1特性。1空白處理三組細(xì)胞,Western blot法檢測LC3BⅡ/LC3BⅠ的比值:RAW264.7-Cor.Minus組RAW264.7組RAW264.7-Cor.Plus組;Western blot法檢測Beclin-1:RAW264.7-Cor.Minus組RAW264.7組RAW264.7-Cor.Plus組;RTPCR法檢測Beclin-1轉(zhuǎn)錄水平,趨勢同Western blot;2饑餓處理三組細(xì)胞,LC3BⅡ/LC3BⅠ的比值:RAW264.7-Cor.Minus組RAW264.7組RAW264.7-Cor.Plus組;3雷帕霉素處理RAW264.7細(xì)胞,其Coronin-1蛋白被顯著抑制;雷帕霉素和環(huán)孢素A分別處理RAW264.7-Cor.Plus細(xì)胞,其LC3BⅡ/LC3BⅠ比值明顯較空白處理組高。結(jié)論:巨噬細(xì)胞Coronin-1與非Mtb源性細(xì)胞自噬具有相關(guān)性。在營養(yǎng)充足狀態(tài)下,Coronin-1可抑制細(xì)胞自噬;在饑餓狀態(tài)下,Coronin-1可促進(jìn)細(xì)胞自噬。Coronin-1對自噬的調(diào)控可能與m TOR和鈣離子信號通路有關(guān)。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)分子醫(yī)學(xué)與腫瘤研究中心基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 巨噬細(xì)胞 Coronin- 自噬 雷帕霉素 環(huán)孢素A 結(jié)核分枝桿菌
【基金】：重慶市科委自然科學(xué)基金項目(cstc2012jjA 10033)
【分類號】：R392
【正文快照】： 1本文為重慶市科委自然科學(xué)基金項目(cstc2012jj A10033)。結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)引起的結(jié)核病是嚴(yán)重威脅人類健康的疾病[1]。Mtb為胞內(nèi)寄生菌,感染人體后主要寄居于巨噬細(xì)胞內(nèi),并可通過誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞高表達(dá)Coronin-1蛋白等使其在細(xì)胞內(nèi)長期存活而引起

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：319449